សូមអរគុណសម្រាប់ការចូលមើលគេហទំព័រ Nature.com។ កំណែកម្មវិធីរុករកដែលអ្នកកំពុងប្រើមានការគាំទ្រ CSS មានកំណត់។ ដើម្បីទទួលបានបទពិសោធន៍ល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យអ្នកប្រើកម្មវិធីរុករកដែលបានធ្វើបច្ចុប្បន្នភាព (ឬបិទរបៀបឆបគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ ទន្ទឹមនឹងនេះ ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្រជាបន្តបន្ទាប់ យើងនឹងបង្ហាញគេហទំព័រដោយគ្មានរចនាប័ទ្ម និង JavaScript។
ភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីន (NPs) ដែលមានផ្ទុកផ្ទុកខ្ពស់បានរកឃើញកម្មវិធីផ្សេងៗគ្នាក្នុងទម្រង់ដូសផ្សេងៗគ្នា។ ការងារនេះមានគោលបំណងវាយតម្លៃឥទ្ធិពលនៃដំណើរការសម្ងួតបង្កក និងសម្ងួតបាញ់លើរចនាសម្ព័ន្ធនៃភាគល្អិតណាណូគីតូសានដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីន ដោយមាន ឬគ្មានម៉ាន់នីតូលជាសារធាតុការពារការកក។ យើងក៏បានវាយតម្លៃគុណភាពនៃភាគល្អិតណាណូទាំងនេះដោយរំលាយវាឡើងវិញ។ មុនពេលខ្សោះជាតិទឹក ទំហំភាគល្អិតនៃភាគល្អិតណាណូដែលភ្ជាប់គ្នារវាងគីតូសាន/សូដ្យូមទ្រីប៉ូលីផូស្វាត/អាំងស៊ុយលីនត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងដល់ 318 nm, PDI គឺ 0.18, ប្រសិទ្ធភាពនៃការរុំព័ទ្ធគឺ 99.4% និងផ្ទុកគឺ 25.01%។ បន្ទាប់ពីការបង្កើតឡើងវិញ ភាគល្អិតណាណូទាំងអស់ លើកលែងតែភាគល្អិតដែលផលិតដោយវិធីសាស្ត្រសម្ងួតបង្កកដោយមិនប្រើម៉ាន់នីតូល រក្សារចនាសម្ព័ន្ធភាគល្អិតស្វ៊ែររបស់វា។ បើប្រៀបធៀបទៅនឹងភាគល្អិតណាណូដែលមានផ្ទុកម៉ាន់នីតូលដែលខ្សោះជាតិទឹកដោយការបាញ់ទាំងពីរ ភាគល្អិតណាណូសម្ងួតបាញ់ដែលគ្មានម៉ាន់នីតូលក៏បានបង្ហាញពីទំហំភាគល្អិតមធ្យមតូចបំផុត (376 nm) និងផ្ទុកខ្ពស់បំផុត។ មាតិកា (25.02%) ជាមួយនឹងអត្រារុំព័ទ្ធស្រដៀងគ្នា (98.7%) និង PDI (0.20) ដោយបច្ចេកទេសសម្ងួត ឬសម្ងួតបង្កក។ ភាគល្អិតណាណូស្ងួតដោយការសម្ងួតបាញ់ដោយគ្មាន mannitol ក៏បណ្តាលឱ្យមានការបញ្ចេញអាំងស៊ុយលីនលឿនបំផុត និងប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់បំផុតនៃការស្រូបយកកោសិកា។ ការងារនេះបង្ហាញថា ការសម្ងួតបាញ់អាចធ្វើឱ្យភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនខ្សោះជាតិទឹកដោយមិនចាំបាច់ប្រើសារធាតុការពារត្រជាក់បើប្រៀបធៀបទៅនឹងវិធីសាស្ត្រសម្ងួតបង្កកធម្មតា ដែលបង្កើតសមត្ថភាពផ្ទុកកាន់តែច្រើន តម្រូវការបន្ថែមទាប និងថ្លៃដើមប្រតិបត្តិការមានអត្ថប្រយោជន៍យ៉ាងសំខាន់។
ចាប់តាំងពីការរកឃើញរបស់វានៅឆ្នាំ 1922 អាំងស៊ុយលីន និងការរៀបចំឱសថរបស់វាបានជួយសង្គ្រោះជីវិតអ្នកជំងឺទឹកនោមផ្អែមប្រភេទទី 1 (T1DM) និងជំងឺទឹកនោមផ្អែមប្រភេទទី 2 (T1DM)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ដោយសារតែលក្ខណៈសម្បត្តិរបស់វាជាប្រូតេអ៊ីនទម្ងន់ម៉ូលេគុលខ្ពស់ អាំងស៊ុយលីនងាយប្រមូលផ្តុំ បំបែកដោយអង់ស៊ីមប្រូតេអូលីទិក និងត្រូវបានលុបចោលដោយឥទ្ធិពលឆ្លងកាត់ដំបូង។ អ្នកដែលត្រូវបានគេធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យថាមានជំងឺទឹកនោមផ្អែមប្រភេទទី 1 ត្រូវការការចាក់អាំងស៊ុយលីនពេញមួយជីវិតរបស់ពួកគេ។ អ្នកជំងឺជាច្រើនដែលត្រូវបានគេធ្វើរោគវិនិច្ឆ័យដំបូងថាមានជំងឺទឹកនោមផ្អែមប្រភេទទី 2 ក៏ត្រូវការការចាក់អាំងស៊ុយលីនរយៈពេលវែងផងដែរ។ ការចាក់អាំងស៊ុយលីនប្រចាំថ្ងៃគឺជាប្រភពដ៏ធ្ងន់ធ្ងរនៃការឈឺចាប់ និងភាពមិនស្រួលប្រចាំថ្ងៃសម្រាប់បុគ្គលទាំងនេះ ដែលមានផលប៉ះពាល់អវិជ្ជមានដល់សុខភាពផ្លូវចិត្ត។ ជាលទ្ធផល ទម្រង់ផ្សេងទៀតនៃការគ្រប់គ្រងអាំងស៊ុយលីនដែលបណ្តាលឱ្យមានភាពមិនស្រួលតិចជាងមុន ដូចជាការគ្រប់គ្រងអាំងស៊ុយលីនតាមមាត់ កំពុងត្រូវបានសិក្សាយ៉ាងទូលំទូលាយ5 ព្រោះវាមានសក្តានុពលក្នុងការស្តារគុណភាពជីវិតរបស់មនុស្សប្រហែល 5 ពាន់លាននាក់ដែលមានជំងឺទឹកនោមផ្អែមនៅទូទាំងពិភពលោក។
បច្ចេកវិទ្យាណាណូភាគល្អិតបានផ្តល់នូវវឌ្ឍនភាពគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងការប៉ុនប៉ងប្រើប្រាស់អាំងស៊ុយលីនតាមមាត់4,6,7។ បច្ចេកវិទ្យាមួយដែលរុំព័ទ្ធ និងការពារអាំងស៊ុយលីនពីការរិចរិលយ៉ាងមានប្រសិទ្ធភាពសម្រាប់ការចែកចាយគោលដៅទៅកាន់កន្លែងជាក់លាក់នៃរាងកាយ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការប្រើប្រាស់រូបមន្តណាណូភាគល្អិតមានដែនកំណត់ជាច្រើន ដែលភាគច្រើនដោយសារតែបញ្ហាស្ថេរភាពនៃស៊ុស្ប៉ង់ស្យុងភាគល្អិត។ ការប្រមូលផ្តុំខ្លះអាចកើតឡើងក្នុងអំឡុងពេលផ្ទុក ដែលកាត់បន្ថយជីវភាពជីវសាស្រ្តនៃភាគល្អិតណាណូដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីន8។ លើសពីនេះ ស្ថេរភាពគីមីនៃម៉ាទ្រីសប៉ូលីមែរនៃភាគល្អិតណាណូ និងអាំងស៊ុយលីនក៏ត្រូវតែពិចារណាផងដែរ ដើម្បីធានាបាននូវស្ថេរភាពនៃភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីន (NPs)។ បច្ចុប្បន្ននេះ បច្ចេកវិទ្យាសម្ងួតបង្កកគឺជាស្តង់ដារមាសសម្រាប់បង្កើត NPs ដែលមានស្ថេរភាព ខណៈពេលដែលការពារការផ្លាស់ប្តូរដែលមិនចង់បានក្នុងអំឡុងពេលផ្ទុក9។
ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការសម្ងួតដោយបង្កកតម្រូវឱ្យមានការបន្ថែមសារធាតុការពារការកក ដើម្បីការពាររចនាសម្ព័ន្ធស្វ៊ែរនៃ NPs ពីការរងផលប៉ះពាល់ដោយភាពតានតឹងមេកានិចនៃគ្រីស្តាល់ទឹកកក។ នេះកាត់បន្ថយការផ្ទុកនៃភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនបន្ទាប់ពីការស្ងួតដោយបង្កកយ៉ាងខ្លាំង ព្រោះសារធាតុការពារការកកកាន់កាប់សមាមាត្រទម្ងន់ភាគច្រើន។ ដូច្នេះ NPs អាំងស៊ុយលីនដែលផលិតបានច្រើនតែត្រូវបានគេរកឃើញថាមិនស័ក្តិសមសម្រាប់ការផលិតរូបមន្តម្សៅស្ងួត ដូចជាថ្នាំគ្រាប់សម្រាប់លេប និងខ្សែភាពយន្តសម្រាប់លេប ដោយសារតែតម្រូវការសម្រាប់ភាគល្អិតណាណូស្ងួតក្នុងបរិមាណច្រើន ដើម្បីសម្រេចបាននូវបង្អួចព្យាបាលនៃអាំងស៊ុយលីន។
ការសម្ងួតដោយបាញ់គឺជាដំណើរការឧស្សាហកម្មដ៏ល្បីល្បាញ និងមានតម្លៃថោកសម្រាប់ផលិតម្សៅស្ងួតពីដំណាក់កាលរាវនៅក្នុងឧស្សាហកម្មឱសថ10,11។ ការគ្រប់គ្រងលើដំណើរការបង្កើតភាគល្អិតអនុញ្ញាតឱ្យមានការរុំព័ទ្ធត្រឹមត្រូវនៃសមាសធាតុជីវសកម្មជាច្រើន12, 13។ លើសពីនេះ វាបានក្លាយជាបច្ចេកទេសដ៏មានប្រសិទ្ធភាពសម្រាប់ការរៀបចំប្រូតេអ៊ីនរុំព័ទ្ធសម្រាប់ការគ្រប់គ្រងមាត់។ ក្នុងអំឡុងពេលសម្ងួតដោយបាញ់ ទឹកហួតយ៉ាងលឿន ដែលជួយរក្សាសីតុណ្ហភាពនៃស្នូលភាគល្អិតឱ្យទាប11,14 ដែលអាចឱ្យកម្មវិធីរបស់វារុំព័ទ្ធសមាសធាតុដែលងាយនឹងកំដៅ។ មុនពេលសម្ងួតដោយបាញ់ សម្ភារៈថ្នាំកូតគួរតែត្រូវបានធ្វើឱ្យដូចគ្នាយ៉ាងហ្មត់ចត់ជាមួយនឹងដំណោះស្រាយដែលមានគ្រឿងផ្សំរុំព័ទ្ធ11,14។ មិនដូចការសម្ងួតដោយបង្កកទេ ការធ្វើឱ្យដូចគ្នាមុនពេលរុំព័ទ្ធក្នុងការសម្ងួតដោយបាញ់ធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវប្រសិទ្ធភាពនៃការរុំព័ទ្ធក្នុងអំឡុងពេលខ្សោះជាតិទឹក។ ដោយសារដំណើរការរុំព័ទ្ធដោយការសម្ងួតដោយបាញ់មិនតម្រូវឱ្យមានសារធាតុការពារការត្រជាក់ ការសម្ងួតដោយបាញ់អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីផលិត NPs ស្ងួតដែលមានមាតិកាផ្ទុកខ្ពស់។
ការសិក្សានេះរាយការណ៍ពីការផលិត NPs ដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីនដោយការភ្ជាប់គ្នានៃ chitosan និង sodium tripolyphosphate ដោយប្រើវិធីសាស្ត្រជែលអ៊ីយ៉ុង។ ការជែលអ៊ីយ៉ុងគឺជាវិធីសាស្ត្ររៀបចំមួយដែលអនុញ្ញាតឱ្យមានការផលិតណាណូភាគល្អិតតាមរយៈអន្តរកម្មអេឡិចត្រូស្តាទិចរវាងប្រភេទអ៊ីយ៉ុងពីរ ឬច្រើនក្រោមលក្ខខណ្ឌជាក់លាក់។ ទាំងបច្ចេកទេសសម្ងួតបង្កក និងសម្ងួតបាញ់ត្រូវបានប្រើដើម្បីសម្ងួតណាណូភាគល្អិតដែលភ្ជាប់គ្នា chitosan/sodium tripolyphosphate/insulin ដែលល្អបំផុត។ បន្ទាប់ពីការខ្សោះជាតិទឹក រូបរាងរបស់វាត្រូវបានវិភាគដោយ SEM។ សមត្ថភាពបញ្ចូលគ្នាឡើងវិញរបស់វាត្រូវបានវាយតម្លៃដោយវាស់ការចែកចាយទំហំ បន្ទុកផ្ទៃ PDI ប្រសិទ្ធភាពរុំព័ទ្ធ និងមាតិកាផ្ទុក។ គុណភាពនៃណាណូភាគល្អិតដែលរលាយដែលផលិតដោយវិធីសាស្ត្រខ្សោះជាតិទឹកផ្សេងៗគ្នាក៏ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយការប្រៀបធៀបការការពារអាំងស៊ុយលីន ឥរិយាបថនៃការបញ្ចេញ និងប្រសិទ្ធភាពស្រូបយកកោសិការបស់ពួកវាផងដែរ។
pH នៃដំណោះស្រាយលាយ និងសមាមាត្រនៃ chitosan និងអាំងស៊ុយលីន គឺជាកត្តាសំខាន់ពីរដែលប៉ះពាល់ដល់ទំហំភាគល្អិត និងប្រសិទ្ធភាពនៃការរុំព័ទ្ធ (EE) នៃ NPs ចុងក្រោយ ព្រោះវាប៉ះពាល់ដោយផ្ទាល់ទៅលើដំណើរការបង្កើតជែលអ៊ីយ៉ូតូត្រូពិច។ pH នៃដំណោះស្រាយលាយត្រូវបានបង្ហាញថាមានទំនាក់ទំនងខ្ពស់ជាមួយនឹងទំហំភាគល្អិត និងប្រសិទ្ធភាពនៃការរុំព័ទ្ធ (រូបភាពទី 1a)។ ដូចបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 1a នៅពេលដែល pH កើនឡើងពី 4.0 ដល់ 6.0 ទំហំភាគល្អិតជាមធ្យម (nm) បានថយចុះ ហើយ EE បានកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់ ខណៈពេលដែលនៅពេលដែល pH កើនឡើងដល់ 6.5 ទំហំភាគល្អិតជាមធ្យមចាប់ផ្តើមកើនឡើង ហើយ EE នៅតែមិនផ្លាស់ប្តូរ។ នៅពេលដែលសមាមាត្រនៃ chitosan ទៅនឹងអាំងស៊ុយលីនកើនឡើង ទំហំភាគល្អិតជាមធ្យមក៏កើនឡើងផងដែរ។ លើសពីនេះ មិនមានការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុង EE ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅពេលដែលណាណូភាគល្អិតត្រូវបានរៀបចំនៅសមាមាត្រម៉ាស់នៃ chitosan/អាំងស៊ុយលីនខ្ពស់ជាង 2.5:1 (w/w) (រូបភាពទី 1b)។ ដូច្នេះ លក្ខខណ្ឌនៃការរៀបចំល្អបំផុតនៅក្នុងការសិក្សានេះ (pH 6.0 សមាមាត្រម៉ាស់ chitosan/អាំងស៊ុយលីន 2.5:1) ត្រូវបានប្រើប្រាស់។ ដើម្បីរៀបចំភាគល្អិតណាណូដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីនសម្រាប់ការសិក្សាបន្ថែម។ ក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃការរៀបចំនេះ ទំហំភាគល្អិតជាមធ្យមនៃភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងដល់ 318 nm (រូបភាពទី 1c) PDI គឺ 0.18 ប្រសិទ្ធភាពបង្កប់គឺ 99.4% សក្តានុពលហ្សេតាគឺ 9.8 mv និងបន្ទុកអាំងស៊ុយលីនគឺ 25.01% (m/m)។ ដោយផ្អែកលើលទ្ធផលមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងបញ្ជូន (TEM) ភាគល្អិតណាណូដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងគឺមានរាងស្វ៊ែរ និងដាច់ពីគ្នាជាមួយនឹងទំហំឯកសណ្ឋានទាក់ទងគ្នា (រូបភាពទី 1d)។
ការបង្កើនប្រសិទ្ធភាពប៉ារ៉ាម៉ែត្រនៃភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីន៖ (ក) ឥទ្ធិពលនៃ pH លើអង្កត់ផ្ចិតមធ្យម និងប្រសិទ្ធភាពរុំព័ទ្ធ (EE) នៃភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីន (រៀបចំនៅសមាមាត្រម៉ាស់ 5:1 នៃ chitosan និងអាំងស៊ុយលីន); (ខ) chitosan និងឥទ្ធិពលនៃសមាមាត្រម៉ាស់នៃអាំងស៊ុយលីនលើអង្កត់ផ្ចិតមធ្យម និងប្រសិទ្ធភាពរុំព័ទ្ធ (EE) នៃ NPs អាំងស៊ុយលីន (រៀបចំនៅ pH 6); (គ) ការចែកចាយទំហំភាគល្អិតនៃភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង; (ឃ) មីក្រូទស្សន៍ TEM នៃ NPs អាំងស៊ុយលីនដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង។
វាត្រូវបានគេដឹងយ៉ាងច្បាស់ថា chitosan គឺជា polyelectrolyte ខ្សោយដែលមាន pKa 6.5។ វាមានបន្ទុកវិជ្ជមាននៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុកអាស៊ីត ពីព្រោះក្រុមអាមីណូសំខាន់របស់វាត្រូវបានប្រូតុងដោយអ៊ីយ៉ុងអ៊ីដ្រូសែន 15។ ដូច្នេះវាត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់ជាឧបករណ៍ផ្ទុកដើម្បីរុំព័ទ្ធម៉ាក្រូម៉ូលេគុលដែលមានបន្ទុកអវិជ្ជមាន។ នៅក្នុងការសិក្សានេះ chitosan ត្រូវបានគេប្រើដើម្បីរុំព័ទ្ធអាំងស៊ុយលីនជាមួយនឹងចំណុចអ៊ីសូអេឡិចត្រិច 5.3។ ដោយសារតែ chitosan ត្រូវបានប្រើជាសម្ភារៈថ្នាំកូត ជាមួយនឹងការកើនឡើងនៃសមាមាត្ររបស់វា កម្រាស់នៃស្រទាប់ខាងក្រៅនៃណាណូភាគល្អិតកើនឡើងតាមនោះ ដែលបណ្តាលឱ្យទំហំភាគល្អិតជាមធ្យមធំជាង។ លើសពីនេះ កម្រិតខ្ពស់នៃ chitosan អាចរុំព័ទ្ធអាំងស៊ុយលីនបានច្រើន។ ក្នុងករណីរបស់យើង EE គឺខ្ពស់បំផុតនៅពេលដែលសមាមាត្រនៃ chitosan និងអាំងស៊ុយលីនឈានដល់ 2.5:1 ហើយមិនមានការផ្លាស់ប្តូរគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុង EE នៅពេលដែលសមាមាត្រនៅតែបន្តកើនឡើង។
ក្រៅពីសមាមាត្រនៃ chitosan និងអាំងស៊ុយលីន pH ក៏បានដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការរៀបចំ NPs ផងដែរ។ Gan et al. 17 បានសិក្សាពីឥទ្ធិពលនៃ pH លើទំហំភាគល្អិតនៃភាគល្អិតណាណូ chitosan។ ពួកគេបានរកឃើញការថយចុះជាបន្តបន្ទាប់នៃទំហំភាគល្អិតរហូតដល់ pH ឈានដល់ 6.0 ហើយការកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃទំហំភាគល្អិតត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅ pH > 6.0 ដែលស្របនឹងការសង្កេតរបស់យើង។ បាតុភូតនេះគឺដោយសារតែការពិតដែលថាជាមួយនឹងការកើនឡើង pH ម៉ូលេគុលអាំងស៊ុយលីនទទួលបានបន្ទុកផ្ទៃអវិជ្ជមាន ដូច្នេះហើយ អំណោយផលដល់អន្តរកម្មអេឡិចត្រូស្តាទិចជាមួយនឹងស្មុគស្មាញ chitosan/sodium tripolyphosphate (TPP) ដែលបណ្តាលឱ្យមានទំហំភាគល្អិតតូច និង EE ខ្ពស់។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ នៅពេលដែល pH ត្រូវបានកែតម្រូវទៅ 6.5 ក្រុមអាមីណូនៅលើ chitosan ត្រូវបាន deprotonated ដែលបណ្តាលឱ្យ chitosan បត់។ ដូច្នេះ pH ខ្ពស់បណ្តាលឱ្យមានការប៉ះពាល់តិចនៃអ៊ីយ៉ុងអាមីណូទៅនឹង TPP និងអាំងស៊ុយលីន ដែលបណ្តាលឱ្យមានការតភ្ជាប់ឆ្លងកាត់ទាប ទំហំភាគល្អិតមធ្យមចុងក្រោយធំជាង និង EE ទាប។
ការវិភាគលក្ខណៈសម្បត្តិរូបវិទ្យានៃ NPs ស្ងួតបង្កក និងស្ងួតបាញ់អាចណែនាំការជ្រើសរើសបច្ចេកទេសខ្សោះជាតិទឹក និងបង្កើតម្សៅកាន់តែប្រសើរ។ វិធីសាស្ត្រដែលពេញចិត្តគួរតែផ្តល់នូវស្ថេរភាពថ្នាំ រូបរាងភាគល្អិតឯកសណ្ឋាន ការផ្ទុកថ្នាំខ្ពស់ និងរលាយល្អនៅក្នុងដំណោះស្រាយដើម។ នៅក្នុងការសិក្សានេះ ដើម្បីប្រៀបធៀបបច្ចេកទេសទាំងពីរឱ្យកាន់តែប្រសើរឡើង NPs អាំងស៊ុយលីនដែលមាន ឬគ្មាន mannitol 1% ត្រូវបានប្រើក្នុងអំឡុងពេលខ្សោះជាតិទឹក។ Mannitol ត្រូវបានប្រើជាសារធាតុបង្កើនបរិមាណ ឬសារធាតុការពារការកកក្នុងរូបមន្តម្សៅស្ងួតផ្សេងៗសម្រាប់ការសម្ងួតបង្កក និងការសម្ងួតបាញ់។ ចំពោះភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនស្ងួតដោយគ្មាន mannitol ដូចបង្ហាញក្នុងរូបភាពទី 2a រចនាសម្ព័ន្ធម្សៅដែលមានរន្ធច្រើនជាមួយនឹងផ្ទៃធំ មិនទៀងទាត់ និងរដុបត្រូវបានគេសង្កេតឃើញក្រោមមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងស្កេន (SEM)។ ភាគល្អិតដាច់ដោយឡែកមួយចំនួនត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងម្សៅបន្ទាប់ពីការខ្សោះជាតិទឹក (រូបភាពទី 2e)។ លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា NPs ភាគច្រើនត្រូវបានរលួយក្នុងអំឡុងពេលសម្ងួតបង្កកដោយគ្មានសារធាតុការពារការកក។ ចំពោះភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនស្ងួតបង្កក និងស្ងួតបាញ់ដែលមាន mannitol 1% ភាគល្អិតណាណូស្វ៊ែរដែលមានផ្ទៃរលោងត្រូវបានគេសង្កេតឃើញ (រូបភាពទី 2)។ 2b, d, f, h)។ ភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនដែលត្រូវបានសម្ងួតដោយបាញ់ដោយគ្មានម៉ាន់នីតូលនៅតែមានរាងស្វ៊ែរ ប៉ុន្តែមានស្នាមជ្រួញនៅលើផ្ទៃ (រូបភាពទី 2c)។ ផ្ទៃស្វ៊ែរ និងស្នាមជ្រួញត្រូវបានពិភាក្សាបន្ថែមទៀតនៅក្នុងឥរិយាបថនៃការបញ្ចេញ និងការធ្វើតេស្តស្រូបយកកោសិកាខាងក្រោម។ ដោយផ្អែកលើរូបរាងដែលអាចមើលឃើញនៃ NPs ស្ងួត ទាំង NPs ស្ងួតដោយបាញ់ដោយគ្មានម៉ាន់នីតូល និង NPs ស្ងួតដោយបង្កក និងសម្ងួតដោយបាញ់ជាមួយម៉ាន់នីតូល បានផ្តល់នូវម្សៅ NPs ល្អិតៗ (រូបភាពទី 2f, g, h)។ ផ្ទៃកាន់តែធំរវាងផ្ទៃភាគល្អិត ភាពរលាយកាន់តែខ្ពស់ ដូច្នេះអត្រានៃការបញ្ចេញកាន់តែខ្ពស់។
សរីរវិទ្យានៃអាំងស៊ុយលីនស្ងួតប្រភេទ NPs ផ្សេងៗគ្នា៖ (ក) រូបភាព SEM នៃអាំងស៊ុយលីនស្ងួតប្រភេទ NPs ដោយគ្មាន mannitol; (ខ) រូបភាព SEM នៃអាំងស៊ុយលីនស្ងួតប្រភេទ NPs ជាមួយ mannitol; (គ) អាំងស៊ុយលីនស្ងួតប្រភេទ NPs ដោយគ្មាន mannitol រូបភាព SEM នៃ ; (ឃ) រូបភាព SEM នៃអាំងស៊ុយលីនស្ងួតប្រភេទ NPs ដោយប្រើ mannitol; (ង) រូបភាពនៃម្សៅអាំងស៊ុយលីនស្ងួតប្រភេទ NPs ដោយគ្មាន mannitol; (ច) រូបភាពនៃអាំងស៊ុយលីនស្ងួតប្រភេទ NPs ដោយប្រើ mannitol; (ឆ) រូបភាពនៃម្សៅអាំងស៊ុយលីនស្ងួតប្រភេទ NPs ដោយគ្មាន mannitol; (ជ) រូបភាពនៃម្សៅអាំងស៊ុយលីនស្ងួតប្រភេទ NPs ដោយប្រើ mannitol។
ក្នុងអំឡុងពេលសម្ងួតបង្កក ម៉ាន់នីតូលដើរតួជាសារធាតុការពារការកក ដោយរក្សា NPs ក្នុងទម្រង់មិនច្បាស់លាស់ និងការពារការខូចខាតដោយគ្រីស្តាល់ទឹកកក19។ ផ្ទុយទៅវិញ មិនមានជំហានបង្កកក្នុងអំឡុងពេលសម្ងួតបាញ់ទេ។ ដូច្នេះ ម៉ាន់នីតូលមិនត្រូវបានទាមទារនៅក្នុងវិធីសាស្ត្រនេះទេ។ តាមពិត NPs សម្ងួតបាញ់ដោយគ្មានម៉ាន់នីតូល បានផ្តល់ NPs ល្អិតៗដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុន។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ម៉ាន់នីតូលនៅតែអាចដើរតួជាសារធាតុបំពេញនៅក្នុងដំណើរការសម្ងួតបាញ់ ដើម្បីផ្តល់ឱ្យ NPs នូវរចនាសម្ព័ន្ធស្វ៊ែរកាន់តែច្រើន20 (រូបភាពទី 2d) ដែលជួយទទួលបានឥរិយាបថបញ្ចេញឯកសណ្ឋាននៃ NPs ដែលរុំព័ទ្ធបែបនេះ។ លើសពីនេះ វាច្បាស់ណាស់ថាភាគល្អិតធំៗមួយចំនួនអាចត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុង NPs អាំងស៊ុយលីនស្ងួតបង្កក និងស្ងួតបាញ់ដែលមានផ្ទុកម៉ាន់នីតូល (រូបភាពទី 2b,d) ដែលអាចបណ្តាលមកពីការប្រមូលផ្តុំម៉ាន់នីតូលនៅក្នុងស្នូលភាគល្អិតរួមជាមួយអាំងស៊ុយលីនរុំព័ទ្ធ។ ទៅ។ស្រទាប់ Chitosan។ គួរកត់សម្គាល់ថានៅក្នុងការសិក្សានេះ ដើម្បីធានាថារចនាសម្ព័ន្ធស្វ៊ែរនៅតែដដែលបន្ទាប់ពីការខ្សោះជាតិទឹក សមាមាត្រនៃ mannitol និង chitosan ត្រូវបានរក្សាទុកនៅ 5:1 ដូច្នេះបរិមាណសារធាតុបំពេញច្រើនក៏អាចពង្រីកទំហំភាគល្អិតនៃ NPs ស្ងួតផងដែរ។
វិសាលគមនៃការឆ្លុះបញ្ចាំងសរុបដែលចុះខ្សោយដោយអ៊ីនហ្វ្រារ៉េដបំលែងហ្វួរៀ (FTIR-ATR) បានកំណត់លក្ខណៈល្បាយរូបវន្តនៃអាំងស៊ុយលីនសេរី គីតូសាន គីតូសាន TPP និងអាំងស៊ុយលីន។ NPs ដែលខ្សោះជាតិទឹកទាំងអស់ត្រូវបានកំណត់លក្ខណៈដោយប្រើវិសាលគម FTIR-ATR។ ជាពិសេស អាំងតង់ស៊ីតេក្រុម 1641, 1543 និង 1412 cm-1 ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុង NPs ដែលរុំព័ទ្ធដោយសារធាតុបង្កកស្ងួតជាមួយម៉ាន់នីតូល និងនៅក្នុង NPs ដែលបាញ់ស្ងួតជាមួយ និងគ្មានម៉ាន់នីតូល (រូបភាពទី 3)។ ដូចដែលបានរាយការណ៍ពីមុន ការកើនឡើងនៃកម្លាំងទាំងនេះត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការភ្ជាប់គ្នារវាងគីតូសាន TPP និងអាំងស៊ុយលីន។ ការស៊ើបអង្កេតអន្តរកម្មរវាងគីតូសាន និងអាំងស៊ុយលីនបានបង្ហាញថា នៅក្នុងវិសាលគម FTIR នៃភាគល្អិតណាណូគីតូសានដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីន ក្រុមគីតូសានត្រួតស៊ីគ្នាជាមួយនឹងក្រុមអាំងស៊ុយលីន ដែលបង្កើនអាំងតង់ស៊ីតេកាបូនីល (1641 cm-1) និងខ្សែក្រវាត់អាមីន (1543 cm-1)។ ក្រុមទ្រីប៉ូលីផូស្វាតនៃ TPP ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងក្រុមអាម៉ូញ៉ូមនៅក្នុងគីតូសាន បង្កើតជាក្រុមមួយ។ នៅ 1412 សង់ទីម៉ែត្រ-1 ។
វិសាលគម FTIR-ATR នៃអាំងស៊ុយលីនសេរី គីតូសាន ល្បាយរូបវន្តនៃគីតូសាន/TPP/អាំងស៊ុយលីន និង NPs ដែលត្រូវបានខ្សោះជាតិទឹកដោយវិធីសាស្ត្រផ្សេងៗគ្នា។
លើសពីនេះ លទ្ធផលទាំងនេះគឺស្របនឹងលទ្ធផលដែលបង្ហាញក្នុង SEM ដែលបង្ហាញថា NPs ដែលរុំព័ទ្ធនៅតែដដែលទាំងនៅពេលបាញ់ថ្នាំ និងសម្ងួតបង្កកជាមួយ mannitol ប៉ុន្តែក្នុងករណីដែលគ្មាន mannitol មានតែការសម្ងួតបាញ់ថ្នាំប៉ុណ្ណោះដែលបង្កើតភាគល្អិតរុំព័ទ្ធ។ ផ្ទុយទៅវិញ លទ្ធផលវិសាលគម FTIR-ATR នៃ NPs ដែលសម្ងួតបង្កកដោយគ្មាន mannitol គឺស្រដៀងគ្នាខ្លាំងណាស់ទៅនឹងល្បាយរូបវន្តនៃ chitosan, TPP និងអាំងស៊ុយលីន។ លទ្ធផលនេះបង្ហាញថា តំណភ្ជាប់រវាង chitosan, TPP និងអាំងស៊ុយលីនលែងមាននៅក្នុង NPs ដែលសម្ងួតបង្កកដោយគ្មាន mannitol ទៀតហើយ។ រចនាសម្ព័ន្ធ NPs ត្រូវបានបំផ្លាញក្នុងអំឡុងពេលសម្ងួតបង្កកដោយគ្មាន cryoprotectant ដែលអាចមើលឃើញនៅក្នុងលទ្ធផល SEM (រូបភាពទី 2a)។ ដោយផ្អែកលើរូបវិទ្យា និងលទ្ធផល FTIR នៃ NPs អាំងស៊ុយលីនដែលខ្សោះជាតិទឹក មានតែ NPs ដែលស្ងួត សម្ងួតបាញ់ថ្នាំ និងគ្មាន mannitol ប៉ុណ្ណោះដែលត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការពិសោធន៍បង្កើតឡើងវិញ និង NPs ដែលគ្មាន mannitol ដោយសារតែការរលួយនៃ NPs ដែលគ្មាន mannitol ក្នុងអំឡុងពេលខ្សោះជាតិទឹក។ សូមពិភាក្សា។
ការខ្សោះជាតិទឹកត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការផ្ទុករយៈពេលវែង និងការកែច្នៃឡើងវិញទៅជារូបមន្តផ្សេងទៀត។ សមត្ថភាពរបស់ NPs ស្ងួតក្នុងការបង្កើតឡើងវិញបន្ទាប់ពីការរក្សាទុកគឺមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការប្រើប្រាស់របស់វានៅក្នុងរូបមន្តផ្សេងៗគ្នាដូចជាថ្នាំគ្រាប់ និងខ្សែភាពយន្ត។ យើងបានកត់សម្គាល់ឃើញថាទំហំភាគល្អិតជាមធ្យមនៃ NPs អាំងស៊ុយលីនស្ងួតបាញ់ដោយគ្មាន mannitol បានកើនឡើងបន្តិចបន្តួចបន្ទាប់ពីការបង្កើតឡើងវិញ។ ម្យ៉ាងវិញទៀត ទំហំភាគល្អិតនៃណាណូភាគល្អិតអាំងស៊ុយលីនស្ងួតបាញ់ និងស្ងួតបង្កកជាមួយ mannitol បានកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់ (តារាងទី 1)។ PDI និង EE មិនត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរគួរឱ្យកត់សម្គាល់ទេ (p > 0.05) បន្ទាប់ពីការបញ្ចូលគ្នាឡើងវិញនៃ NPs ទាំងអស់នៅក្នុងការសិក្សានេះ (តារាងទី 1)។ លទ្ធផលនេះបង្ហាញថាភាគល្អិតភាគច្រើននៅតែដដែលបន្ទាប់ពីរលាយឡើងវិញ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការបន្ថែម mannitol បានបណ្តាលឱ្យមានការថយចុះយ៉ាងខ្លាំងនៃការផ្ទុកអាំងស៊ុយលីននៃណាណូភាគល្អិត mannitol ដែលត្រូវបាន lyophilized និងស្ងួតបាញ់ (តារាងទី 1)។ ផ្ទុយទៅវិញ មាតិកាផ្ទុកអាំងស៊ុយលីននៃ NPs ស្ងួតបាញ់ដោយគ្មាន mannitol នៅតែដដែលដូចមុន (តារាងទី 1)។
វាត្រូវបានគេដឹងយ៉ាងច្បាស់ថា ការផ្ទុកភាគល្អិតណាណូគឺមានសារៈសំខាន់ខ្លាំងណាស់នៅពេលប្រើសម្រាប់គោលបំណងចែកចាយថ្នាំ។ ចំពោះ NPs ដែលមានការផ្ទុកទាប ត្រូវការសម្ភារៈបរិមាណច្រើនដើម្បីឈានដល់កម្រិតព្យាបាល។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ viscosity ខ្ពស់នៃកំហាប់ NP ខ្ពស់បែបនេះនាំឱ្យមានការរអាក់រអួល និងការលំបាកក្នុងការគ្រប់គ្រងតាមមាត់ និងរូបមន្តចាក់រៀងៗខ្លួន 22។ លើសពីនេះ NPs អាំងស៊ុយលីនក៏អាចត្រូវបានប្រើដើម្បីធ្វើថ្នាំគ្រាប់ និងជីវហ្វីមដែលមាន viscous 23, 24 ដែលតម្រូវឱ្យប្រើប្រាស់ NPs បរិមាណច្រើននៅកម្រិតផ្ទុកទាប ដែលបណ្តាលឱ្យមានថ្នាំគ្រាប់ធំៗ និងជីវហ្វីមក្រាស់ដែលមិនស័ក្តិសមសម្រាប់ការប្រើប្រាស់តាមមាត់។ ដូច្នេះ NPs ដែលខ្សោះជាតិទឹកដែលមានបន្ទុកអាំងស៊ុយលីនខ្ពស់គឺជាការចង់បានខ្ពស់។ លទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថា បន្ទុកអាំងស៊ុយលីនខ្ពស់នៃ NPs ស្ងួតបាញ់ដែលគ្មាន mannitol អាចផ្តល់នូវគុណសម្បត្តិទាក់ទាញជាច្រើនសម្រាប់វិធីសាស្រ្តចែកចាយជំនួសទាំងនេះ។
NPs ស្ងួតទាំងអស់ត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងទូទឹកកករយៈពេលបីខែ។ លទ្ធផល SEM បានបង្ហាញថា រូបរាងរបស់ NPs ស្ងួតទាំងអស់មិនមានការផ្លាស់ប្តូរគួរឱ្យកត់សម្គាល់ក្នុងអំឡុងពេលផ្ទុករយៈពេលបីខែទេ (រូបភាពទី 4)។ បន្ទាប់ពីធ្វើឱ្យរលាយក្នុងទឹក NPs ទាំងអស់បានបង្ហាញពីការថយចុះបន្តិចបន្តួចនៃ EE និងបានបញ្ចេញអាំងស៊ុយលីនប្រហែលតិចតួច (~5%) ក្នុងអំឡុងពេលផ្ទុករយៈពេលបីខែ (តារាងទី 2)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ទំហំភាគល្អិតជាមធ្យមនៃណាណូភាគល្អិតទាំងអស់បានកើនឡើង។ ទំហំភាគល្អិតនៃ NPs ស្ងួតដោយបាញ់ដោយគ្មាន mannitol បានកើនឡើងដល់ 525 nm ខណៈពេលដែល NPs ស្ងួតដោយបាញ់ និងស្ងួតដោយបង្កកជាមួយ mannitol បានកើនឡើងដល់ 872 និង 921 nm រៀងគ្នា (តារាងទី 2)។
សរីរវិទ្យានៃអាំងស៊ុយលីនស្ងួតប្រភេទ NP ផ្សេងៗគ្នាដែលរក្សាទុករយៈពេលបីខែ៖ (ក) រូបភាព SEM នៃអាំងស៊ុយលីនស្ងួតប្រភេទ NP ជាមួយម៉ាន់នីតូល; (ខ) រូបភាព SEM នៃភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនស្ងួតបាញ់ដោយគ្មានម៉ាន់នីតូល; (គ) ដោយគ្មានម៉ាន់នីតូល រូបភាព SEM នៃអាំងស៊ុយលីនស្ងួតបាញ់។
លើសពីនេះ ទឹកភ្លៀងត្រូវបានគេឃើញនៅក្នុងភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនដែលបានកែច្នៃឡើងវិញ ដែលត្រូវបានសម្ងួតដោយបាញ់ជាមួយម៉ាន់នីតូល និងសម្ងួតដោយបង្កក (រូបភាព S2)។ នេះអាចបណ្តាលមកពីភាគល្អិតធំៗមិនជាប់ក្នុងទឹក។ លទ្ធផលទាំងអស់ខាងលើបង្ហាញថា បច្ចេកទេសសម្ងួតដោយបាញ់អាចការពារភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនពីការខ្សោះជាតិទឹក ហើយថាការផ្ទុកភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនច្រើនអាចទទួលបានដោយមិនចាំបាច់មានសារធាតុបំពេញ ឬសារធាតុការពារការត្រជាក់។
ការរក្សាអាំងស៊ុយលីនត្រូវបានធ្វើតេស្តនៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុក pH = 2.5 ជាមួយ pepsin, trypsin និង α-chymotrypsin ដើម្បីបង្ហាញពីសមត្ថភាពការពាររបស់ NPs ប្រឆាំងនឹងការរំលាយអាហារដោយអង់ស៊ីមបន្ទាប់ពីការខ្សោះជាតិទឹក។ ការរក្សាអាំងស៊ុយលីននៃ NPs ខ្សោះជាតិត្រូវបានប្រៀបធៀបជាមួយនឹង NPs ដែលរៀបចំថ្មីៗ ហើយអាំងស៊ុយលីនសេរីត្រូវបានប្រើជាការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាន។ នៅក្នុងការសិក្សានេះ អាំងស៊ុយលីនសេរីបានបង្ហាញពីការបញ្ចេញអាំងស៊ុយលីនយ៉ាងឆាប់រហ័សក្នុងរយៈពេល 4 ម៉ោងក្នុងការព្យាបាលដោយអង់ស៊ីមទាំងបី (រូបភាពទី 5a-c)។ ផ្ទុយទៅវិញ ការធ្វើតេស្តលុបបំបាត់អាំងស៊ុយលីននៃ NPs ដែលបង្កកជាមួយ mannitol និង NPs ដែលបាញ់សម្ងួតជាមួយ ឬគ្មាន mannitol បានបង្ហាញពីការការពារខ្ពស់ជាងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃ NPs ទាំងនេះប្រឆាំងនឹងការរំលាយអាហារដោយអង់ស៊ីម ដែលស្រដៀងគ្នាទៅនឹង NPs អាំងស៊ុយលីនដែលរៀបចំថ្មីៗ (រូបភាពទី 1)។ 5a-c)។ ដោយមានជំនួយពីណាណូភាគល្អិតនៅក្នុង pepsin, trypsin និង α-chymotrypsin អាំងស៊ុយលីនជាង 50%, 60% និង 75% អាចត្រូវបានការពារក្នុងរយៈពេល 4 ម៉ោងរៀងៗខ្លួន (រូបភាពទី 5a-c)។ សមត្ថភាពការពារអាំងស៊ុយលីននេះអាចបង្កើនឱកាសនៃការស្រូបយកអាំងស៊ុយលីនកាន់តែខ្ពស់។ ចូលទៅក្នុងចរន្តឈាម25។ លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា ការសម្ងួតដោយបាញ់ជាមួយ ឬគ្មានម៉ាន់នីតូល និងការសម្ងួតបង្កកជាមួយម៉ាន់នីតូល អាចរក្សាសមត្ថភាពការពារអាំងស៊ុយលីនរបស់ NPs បន្ទាប់ពីការខ្សោះជាតិទឹក។
ការការពារ និងឥរិយាបថនៃការបញ្ចេញសារធាតុ NPs អាំងស៊ុយលីនខ្សោះជាតិទឹក៖ (ក) ការការពារអាំងស៊ុយលីននៅក្នុងដំណោះស្រាយ pepsin; (ខ) ការការពារអាំងស៊ុយលីននៅក្នុងដំណោះស្រាយ trypsin; (គ) ការការពារអាំងស៊ុយលីនដោយដំណោះស្រាយ α-chymotrypsin; (ឃ) ឥរិយាបថនៃការបញ្ចេញសារធាតុ NPs ខ្សោះជាតិទឹកនៅក្នុងដំណោះស្រាយ pH = 2.5; (ង) ឥរិយាបថនៃការបញ្ចេញសារធាតុ NPs ខ្សោះជាតិទឹកនៅក្នុងដំណោះស្រាយ pH = 6.6; (ច) ឥរិយាបថនៃការបញ្ចេញសារធាតុ NPs ខ្សោះជាតិទឹកនៅក្នុងដំណោះស្រាយ pH = 7.0។
អាំងស៊ុយលីនស្ងួត NPs ដែលទើបរៀបចំថ្មីៗ និងកែច្នៃឡើងវិញ ត្រូវបានភ្ញាស់ក្នុងសារធាតុរាវផ្សេងៗ (pH = 2.5, 6.6, 7.0) នៅសីតុណ្ហភាព 37°C ដោយធ្វើត្រាប់តាមបរិស្ថាន pH នៃក្រពះ ពោះវៀនតូចទីពីរ និងពោះវៀនតូចផ្នែកខាងលើ ដើម្បីពិនិត្យមើលឥទ្ធិពលនៃអាំងស៊ុយលីនទៅលើភាពធន់នឹងអាំងស៊ុយលីន។ ឥរិយាបថនៃការបញ្ចេញនៅក្នុងបរិស្ថានផ្សេងៗគ្នា។ បំណែកនៃបំពង់រំលាយអាហារ។ នៅ pH = 2.5 សារធាតុ NP ដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីន និងសារធាតុ NP អាំងស៊ុយលីនស្ងួតដែលរលាយឡើងវិញបានបង្ហាញពីការបញ្ចេញដំបូងក្នុងរយៈពេលមួយម៉ោងដំបូង បន្ទាប់មកដោយការបញ្ចេញយឺតៗក្នុងរយៈពេល 5 ម៉ោងបន្ទាប់ (រូបភាពទី 5d)។ ការបញ្ចេញយ៉ាងឆាប់រហ័សនេះនៅដើមដំបូងទំនងជាលទ្ធផលនៃការបញ្ចេញផ្ទៃយ៉ាងលឿននៃម៉ូលេគុលប្រូតេអ៊ីនដែលមិនត្រូវបានធ្វើឱ្យសកម្មទាំងស្រុងនៅក្នុងរចនាសម្ព័ន្ធខាងក្នុងនៃភាគល្អិត។ នៅ pH = 6.5 សារធាតុ NP ដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីន និងសារធាតុ NP អាំងស៊ុយលីនស្ងួតដែលបានបង្កើតឡើងវិញបានបង្ហាញពីការបញ្ចេញយ៉ាងរលូន និងយឺតៗក្នុងរយៈពេល 6 ម៉ោង ដោយសារ pH នៃដំណោះស្រាយសាកល្បងគឺស្រដៀងគ្នាទៅនឹងដំណោះស្រាយដែលរៀបចំដោយ NP (រូបភាពទី 5e)។ នៅ pH = 7 សារធាតុ NP មិនស្ថិតស្ថេរ និងរលួយស្ទើរតែទាំងស្រុងក្នុងរយៈពេលពីរម៉ោងដំបូង (រូបភាពទី 5f)។ នេះគឺដោយសារតែការថយចុះប្រូតុងនៃ chitosan កើតឡើងនៅ pH ខ្ពស់ ដែលបណ្តាលឱ្យមានបណ្តាញប៉ូលីមែរតូចចង្អៀត និងការបញ្ចេញអាំងស៊ុយលីនដែលផ្ទុក។
លើសពីនេះ អាំងស៊ុយលីន NPs ដែលសម្ងួតដោយបាញ់ដោយគ្មាន mannitol បានបង្ហាញពីទម្រង់នៃការបញ្ចេញលឿនជាង NPs ដែលខ្សោះជាតិទឹកផ្សេងទៀត (រូបភាពទី 5d-f)។ ដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុន អាំងស៊ុយលីន NPs ដែលបានបង្កើតឡើងវិញ ដែលសម្ងួតដោយគ្មាន mannitol បានបង្ហាញពីទំហំភាគល្អិតតូចបំផុត។ ភាគល្អិតតូចៗផ្តល់នូវផ្ទៃធំជាង ដូច្នេះថ្នាំភាគច្រើនដែលពាក់ព័ន្ធនឹងស្ថិតនៅ ឬជិតផ្ទៃភាគល្អិត ដែលបណ្តាលឱ្យមានការបញ្ចេញថ្នាំយ៉ាងឆាប់រហ័ស26។
ភាពពុលកោសិការបស់ NPs ត្រូវបានស៊ើបអង្កេតដោយការវិភាគ MTT។ ដូចបង្ហាញក្នុងរូបភាព S4 NPs ដែលខ្សោះជាតិទឹកទាំងអស់ត្រូវបានគេរកឃើញថាមិនមានឥទ្ធិពលគួរឱ្យកត់សម្គាល់លើសមត្ថភាពរស់រានមានជីវិតរបស់កោសិកានៅកំហាប់ 50–500 μg/ml ដែលបង្ហាញថា NPs ដែលខ្សោះជាតិទឹកទាំងអស់អាចត្រូវបានប្រើដោយសុវត្ថិភាពដើម្បីឈានដល់រយៈពេលព្យាបាល។
ថ្លើមគឺជាសរីរាង្គសំខាន់ដែលអាំងស៊ុយលីនបញ្ចេញមុខងារសរីរវិទ្យារបស់វា។ កោសិកា HepG2 គឺជាខ្សែកោសិកា hepatoma របស់មនុស្សដែលត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅជាគំរូទទួលយក hepatocyte ក្នុង vitro។ នៅទីនេះ កោសិកា HepG2 ត្រូវបានប្រើដើម្បីវាយតម្លៃការទទួលយកកោសិកានៃ NPs ដែលខ្សោះជាតិទឹកដោយប្រើវិធីសាស្ត្រសម្ងួតបង្កក និងសម្ងួតបាញ់។ ការទទួលយកកោសិកាដោយការស្កេនឡាស៊ែរ confocal ដោយប្រើ flow cytometry និងការមើលឃើញបន្ទាប់ពីការភ្ញាស់រយៈពេលជាច្រើនម៉ោងជាមួយអាំងស៊ុយលីន FITC ឥតគិតថ្លៃក្នុងកំហាប់ 25 μg/mL NPs ដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីន FITC ដែលរៀបចំថ្មីៗ និង NPs ដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីន FITC ដែលខ្សោះជាតិទឹកក្នុងកំហាប់អាំងស៊ុយលីនស្មើគ្នា ការសង្កេតមីក្រូទស្សន៍បរិមាណ (CLSM) ត្រូវបានអនុវត្ត។ NPs ដែលស្ងួតដោយគ្មាន mannitol ត្រូវបានបំផ្លាញក្នុងអំឡុងពេលខ្សោះជាតិទឹក ហើយមិនត្រូវបានវាយតម្លៃនៅក្នុងការធ្វើតេស្តនេះទេ។ អាំងតង់ស៊ីតេ fluorescence ក្នុងកោសិកានៃ NPs ដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីនដែលរៀបចំថ្មីៗ NPs ដែលស្ងួតជាមួយ mannitol និង NPs ដែលស្ងួតបាញ់ជាមួយ និងគ្មាន mannitol (រូបភាពទី 6a) គឺ 4.3, 2.6, 2.4 និង 4.1 ដង។ ខ្ពស់ជាងក្រុមអាំងស៊ុយលីនសេរី។ ក្រុម FITC រៀងៗខ្លួន (រូបភាពទី 6b)។ លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា អាំងស៊ុយលីនរុំព័ទ្ធមានប្រសិទ្ធភាពជាងក្នុងការស្រូបយកកោសិកាជាងអាំងស៊ុយលីនសេរី ដែលភាគច្រើនដោយសារតែទំហំតូចជាងនៃភាគល្អិតណាណូដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីនដែលផលិតនៅក្នុងការសិក្សា។
ការទទួលយកកោសិកា HepG2 បន្ទាប់ពីការភ្ញាស់រយៈពេល 4 ម៉ោងជាមួយ NPs ដែលបានរៀបចំថ្មីៗ និង NPs ដែលខ្សោះជាតិទឹក៖ (ក) ការចែកចាយនៃការទទួលយកអាំងស៊ុយលីន FITC ដោយកោសិកា HepG2។ (ខ) មធ្យមធរណីមាត្រនៃអាំងតង់ស៊ីតេពន្លឺដែលវិភាគដោយលំហូរស៊ីតូម៉ែត្រី (n = 3), *P < 0.05 បើប្រៀបធៀបជាមួយអាំងស៊ុយលីនសេរី។
ដូចគ្នានេះដែរ រូបភាព CLSM បានបង្ហាញថា អាំងតង់ស៊ីតេនៃការបញ្ចេញពន្លឺ FITC នៃ NPs ដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីន FITC ដែលទើបរៀបចំថ្មីៗ និង NPs ស្ងួតដោយបាញ់ FITC ដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីន FITC (ដោយគ្មានម៉ាន់នីតូល) គឺខ្លាំងជាងគំរូផ្សេងទៀត (រូបភាពទី 6a)។ លើសពីនេះ ជាមួយនឹងការបន្ថែមម៉ាន់នីតូល ភាពស្អិតខ្ពស់នៃដំណោះស្រាយបានបង្កើនភាពធន់នឹងការស្រូបយកកោសិកា ដែលបណ្តាលឱ្យមានការរីកសាយអាំងស៊ុយលីនថយចុះ។ លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា NPs ស្ងួតដោយបាញ់ដែលគ្មានម៉ាន់នីតូលបានបង្ហាញពីប្រសិទ្ធភាពស្រូបយកកោសិកាខ្ពស់បំផុត ពីព្រោះទំហំភាគល្អិតរបស់វាតូចជាង NPs ស្ងួតដោយបង្កកបន្ទាប់ពីរំលាយឡើងវិញ។
គីតូសាន (ទម្ងន់ម៉ូលេគុលជាមធ្យម 100 KDa, 75–85% deacetylated) ត្រូវបានទិញពី Sigma-Aldrich (Oakville, Ontario, កាណាដា)។ សូដ្យូមទ្រីប៉ូលីផូស្វាត (TPP) ត្រូវបានទិញពី VWR (Radnor, Pennsylvania, សហរដ្ឋអាមេរិក)។ អាំងស៊ុយលីនមនុស្សផ្សំឡើងវិញដែលប្រើក្នុងការសិក្សានេះគឺមកពី Fisher Scientific (Waltham, MA, សហរដ្ឋអាមេរិក)។ អាំងស៊ុយលីនមនុស្សដែលមានស្លាក Fluorescein isothiocyanate (FITC) និង 4′,6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI) ត្រូវបានទិញពី Sigma-Aldrich (Oakville, Ontario, កាណាដា)។ ខ្សែកោសិកា HepG2 ត្រូវបានទទួលពី ATCC (Manassas, Virginia, សហរដ្ឋអាមេរិក)។ សារធាតុប្រតិកម្មផ្សេងទៀតទាំងអស់គឺជាថ្នាក់វិភាគ ឬថ្នាក់ក្រូម៉ាតូក្រាហ្វី។
រៀបចំដំណោះស្រាយ CS 1 mg/ml ដោយរំលាយវាក្នុងទឹកចម្រោះពីរជាន់ (ទឹក DD) ដែលមានអាស៊ីតអាសេទិក 0.1%។ រៀបចំដំណោះស្រាយ 1 mg/ml នៃ TPP និងអាំងស៊ុយលីន ដោយរំលាយវាក្នុងទឹក DD និងអាស៊ីតអាសេទិក 0.1% រៀងៗខ្លួន។ សារធាតុ emulsion ត្រូវបានរៀបចំជាមួយម៉ាស៊ីន homogenizer ល្បឿនលឿន polytron PCU-2-110 (Brinkmann Ind. Westbury, NY, USA)។ ដំណើរការរៀបចំមានដូចខាងក្រោម៖ ដំបូង ដំណោះស្រាយ TPP 2ml ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងដំណោះស្រាយអាំងស៊ុយលីន 4ml ហើយល្បាយនេះត្រូវបានកូររយៈពេល 30 នាទី ហើយលាយបញ្ចូលគ្នាទាំងស្រុង។ បន្ទាប់មក ដំណោះស្រាយលាយត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងដំណោះស្រាយ CS តាមលំដាប់លំដោយតាមរយៈសឺរាំងក្រោមការកូរល្បឿនលឿន (10,000 rpm)។ ល្បាយត្រូវបានរក្សាទុកក្រោមការកូរល្បឿនលឿន (15,000 rpm) ក្នុងអាងទឹកកករយៈពេល 30 នាទី ហើយពួកវាត្រូវបានកែតម្រូវទៅ pH ជាក់លាក់មួយដើម្បីទទួលបាន NPs អាំងស៊ុយលីនដែលមានតំណភ្ជាប់ឆ្លងកាត់។ ដើម្បីធ្វើឱ្យ homogenize បន្ថែមទៀត និងកាត់បន្ថយទំហំភាគល្អិតនៃ NPs អាំងស៊ុយលីន ពួកវាត្រូវបាន sonicated សម្រាប់បន្ថែម។ ៣០ នាទី ក្នុង​អាង​ទឹកកក ដោយ​ប្រើ​ឧបករណ៍​សូនីយ៉ូន​ប្រភេទ​ស៊ើបអង្កេត (UP 200ST, Hielscher Ultrasonics, Teltow, អាល្លឺម៉ង់)។
អាំងស៊ុយលីន NPS ត្រូវបានសាកល្បងសម្រាប់អង្កត់ផ្ចិតជាមធ្យម Z សន្ទស្សន៍ពហុបំបែក (PDI) និងសក្តានុពលហ្សេតាដោយប្រើការវាស់វែងការខ្ចាត់ខ្ចាយពន្លឺថាមវន្ត (DLS) ដោយប្រើ Litesizer 500 (Anton Paar, Graz, អូទ្រីស) ដោយពនលាយវាក្នុងទឹក DD នៅសីតុណ្ហភាព 25°C។ រូបរាង និងការចែកចាយទំហំត្រូវបានកំណត់លក្ខណៈដោយមីក្រូទស្សន៍អេឡិចត្រុងបញ្ជូន Hitachi H7600 (TEM) (Hitachi, តូក្យូ, ជប៉ុន) ហើយរូបភាពត្រូវបានវិភាគជាបន្តបន្ទាប់ដោយប្រើកម្មវិធីថតរូបភាព Hitachi (Hitachi, តូក្យូ, ជប៉ុន)។ ដើម្បីវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាពនៃការរុំព័ទ្ធ (EE) និងសមត្ថភាពផ្ទុក (LC) នៃអាំងស៊ុយលីន NPs NPs ត្រូវបានចាក់ចូលទៅក្នុងបំពង់ ultrafiltration ដែលមានទម្ងន់ម៉ូលេគុលកាត់ផ្តាច់ 100 kDa ហើយបង្វិលនៅ 500 xg រយៈពេល 30 នាទី។ អាំងស៊ុយលីនដែលមិនបានរុំព័ទ្ធនៅក្នុង filtrate ត្រូវបានវាស់បរិមាណដោយប្រើប្រព័ន្ធ Agilent 1100 Series HPLC (Agilent, Santa Clara, California, សហរដ្ឋអាមេរិក) ដែលមានស្នប់ quaternary, autosampler, column heater និង DAD។ ឧបករណ៍ចាប់សញ្ញា។ អាំងស៊ុយលីនត្រូវបានវិភាគដោយជួរឈរ C18 (Zorbax, 3.5 μm, 4.6 mm × 150 mm, Agilent, សហរដ្ឋអាមេរិក) ហើយត្រូវបានរកឃើញនៅ 214 nm។ ដំណាក់កាលចល័តគឺ acetonitrile និងទឹក ដែលមាន TFA 0.1% សមាមាត្រជម្រាលពី 10/90 ដល់ 100/0 ហើយដំណើរការរយៈពេល 10 នាទី។ ដំណាក់កាលចល័តត្រូវបានបូមក្នុងអត្រាលំហូរ 1.0 ml/នាទី។ សីតុណ្ហភាពជួរឈរត្រូវបានកំណត់ទៅ 20 °C។ គណនាភាគរយនៃ EE និង LC ដោយប្រើសមីការ (1) និង Eq. (2)។
សមាមាត្រ CS/អាំងស៊ុយលីនផ្សេងៗគ្នាចាប់ពី 2.0 ដល់ 4.0 ត្រូវបានសាកល្បងដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពអាំងស៊ុយលីន NP។ បរិមាណដំណោះស្រាយ CS ផ្សេងៗគ្នាត្រូវបានបន្ថែមក្នុងអំឡុងពេលរៀបចំ ខណៈពេលដែលល្បាយអាំងស៊ុយលីន/TPP ត្រូវបានរក្សាឱ្យនៅថេរ។ អាំងស៊ុយលីន NPs ត្រូវបានរៀបចំក្នុងចន្លោះ pH ពី 4.0 ដល់ 6.5 ដោយគ្រប់គ្រង pH នៃល្បាយដោយប្រុងប្រយ័ត្នបន្ទាប់ពីបន្ថែមដំណោះស្រាយទាំងអស់ (អាំងស៊ុយលីន TPP និង CS)។ EE និងទំហំភាគល្អិតនៃណាណូភាគល្អិតអាំងស៊ុយលីនត្រូវបានវាយតម្លៃនៅតម្លៃ pH ផ្សេងៗគ្នា និងសមាមាត្រម៉ាស់ CS/អាំងស៊ុយលីន ដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពការបង្កើតអាំងស៊ុយលីន NPs។
អាំងស៊ុយលីន NPs ដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងត្រូវបានដាក់នៅលើធុងអាលុយមីញ៉ូម ហើយគ្របដោយជាលិកាដែលរឹតដោយកាសែតខ្លះ។ បន្ទាប់មក ធុងដែលវីសត្រូវបានដាក់ក្នុងម៉ាស៊ីនសម្ងួតបង្កក Labconco FreeZone (Labconco, Kansas City, MO, USA) ដែលបំពាក់ដោយម៉ាស៊ីនសម្ងួតថាស។ សីតុណ្ហភាព និងសម្ពាធសុញ្ញកាសត្រូវបានកំណត់នៅ -10°C, 0.350 Torr សម្រាប់រយៈពេល 2 ម៉ោងដំបូង និង 0°C និង 0.120 Torr សម្រាប់រយៈពេល 22 ម៉ោងដែលនៅសល់នៃ 24 ម៉ោង ដើម្បីទទួលបានអាំងស៊ុយលីន NPs ស្ងួត។
ម៉ាស៊ីនសម្ងួតបាញ់ថ្នាំខ្នាតតូច Buchi Mini Spray Dryer B-290 (BÜCHI, Flawil, ស្វីស) ត្រូវបានប្រើដើម្បីបង្កើតអាំងស៊ុយលីនរុំព័ទ្ធ។ ប៉ារ៉ាម៉ែត្រសម្ងួតដែលបានជ្រើសរើសគឺ៖ សីតុណ្ហភាព 100 °C លំហូរចំណី 3 លីត្រ/នាទី និងលំហូរឧស្ម័ន 4 លីត្រ/នាទី។
អាំងស៊ុយលីន NPs មុន និងក្រោយពេលខ្សោះជាតិទឹកត្រូវបានកំណត់លក្ខណៈដោយប្រើវិសាលគម FTIR-ATR។ ភាគល្អិតណាណូខ្សោះជាតិទឹក ក៏ដូចជាអាំងស៊ុយលីនសេរី និង chitosan ត្រូវបានវិភាគដោយប្រើវិសាលគម Spectrum 100 FTIR (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, USA) ដែលបំពាក់ដោយឧបករណ៍យកសំណាក ATR ជាសកល (PerkinElmer, Waltham, Massachusetts, USA)។ មធ្យមភាគសញ្ញាត្រូវបានទទួលពីការស្កេនចំនួន 16 ក្នុងគុណភាពបង្ហាញ 4 cm2 ក្នុងចន្លោះប្រេកង់ 4000-600 cm2។
រូបរាង​នៃ​អាំងស៊ុយលីន NPs ស្ងួត​ត្រូវ​បាន​វាយតម្លៃ​ដោយ​រូបភាព SEM នៃ​អាំងស៊ុយលីន NPs ស្ងួត​បង្កក និង​ស្ងួត​បាញ់ ដែល​ថត​ដោយ​មីក្រូទស្សន៍​អេឡិចត្រុង​ស្កេន​ធ្នឹម​អ៊ីយ៉ុង​ផ្តោត​លើ Helios NanoLab 650 (FIB-SEM) (FEI, Hillsboro, Oregon, USA)។ ប៉ារ៉ាម៉ែត្រ​សំខាន់​ដែល​ប្រើ​គឺ​វ៉ុល 5 keV និង​ចរន្ត 30 mA។
អាំងស៊ុយលីន NPs ដែលខ្សោះជាតិទឹកទាំងអស់ត្រូវបានរំលាយឡើងវិញក្នុងទឹក dd។ ទំហំភាគល្អិត, PDI, EE និង LC ត្រូវបានធ្វើតេស្តម្តងទៀតដោយប្រើវិធីសាស្ត្រដូចគ្នាដែលបានរៀបរាប់ខាងលើ ដើម្បីវាយតម្លៃគុណភាពរបស់វាបន្ទាប់ពីការខ្សោះជាតិទឹក។ ស្ថេរភាពនៃ anhydroinsulin NPs ក៏ត្រូវបានវាស់វែងដោយការធ្វើតេស្តលក្ខណៈសម្បត្តិរបស់ NPs បន្ទាប់ពីការផ្ទុកយូរ។ នៅក្នុងការសិក្សានេះ NPs ទាំងអស់បន្ទាប់ពីការខ្សោះជាតិទឹកត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងទូទឹកកករយៈពេលបីខែ។ បន្ទាប់ពីផ្ទុកបានបីខែ NPs ត្រូវបានធ្វើតេស្តសម្រាប់ទំហំភាគល្អិតរូបវិទ្យា, PDI, EE និង LC។
រំលាយ NPs ដែលបានកែច្នៃឡើងវិញចំនួន 5 មីលីលីត្រ ក្នុងទឹក 45 មីលីលីត្រ ដែលមានសារធាតុរាវក្រពះសិប្បនិម្មិត (pH 1.2 មានផ្ទុក pepsin 1%) សារធាតុរាវពោះវៀន (pH 6.8 មានផ្ទុក trypsin 1%) ឬដំណោះស្រាយ chymotrypsin (100 ក្រាម/មីលីលីត្រ ក្នុងសារធាតុ phosphate buffer pH 7.8) ដើម្បីវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាពនៃអាំងស៊ុយលីនក្នុងការការពារ NPs បន្ទាប់ពីការខ្សោះជាតិទឹក។ ពួកវាត្រូវបានភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C ជាមួយនឹងល្បឿនកូរ 100 rpm។ ដំណោះស្រាយ 500 μL ត្រូវបានប្រមូលនៅចំណុចពេលវេលាផ្សេងៗគ្នា ហើយកំហាប់អាំងស៊ុយលីនត្រូវបានកំណត់ដោយ HPLC។
ឥរិយាបថនៃការបញ្ចេញក្នុងវីត្រូនៃអាំងស៊ុយលីន NPs ដែលទើបរៀបចំថ្មីៗ និងដែលខ្សោះជាតិទឹកត្រូវបានសាកល្បងដោយវិធីសាស្ត្រថង់លាងឈាម (ទម្ងន់ម៉ូលេគុលកាត់ផ្តាច់ 100 kDa, Spectra Por Inc.)។ NPs ស្ងួតដែលទើបរៀបចំថ្មីៗ និងដែលបានផ្សំឡើងវិញត្រូវបានលាងឈាមក្នុងសារធាតុរាវនៅ pH 2.5, pH 6.6 និង pH 7.0 (អំបិលផូស្វាត 0.1 M, PBS) ដើម្បីក្លែងធ្វើបរិស្ថាន pH នៃក្រពះ ពោះវៀនតូច និងពោះវៀនតូចផ្នែកខាងលើរៀងៗខ្លួន។ គំរូទាំងអស់ត្រូវបានភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C ជាមួយនឹងការអង្រួនជាបន្តបន្ទាប់ក្នុងល្បឿន 200 rpm។ បឺតយកសារធាតុរាវចេញពីថង់លាងឈាម 5 mL នៅពេលវេលាដូចខាងក្រោម៖ 0.5, 1, 2, 3, 4 និង 6 ម៉ោង ហើយបំពេញបរិមាណភ្លាមៗជាមួយនឹងសារធាតុលាងឈាមថ្មី។ ការចម្លងរោគអាំងស៊ុយលីននៅក្នុងសារធាតុរាវត្រូវបានវិភាគដោយ HPLC ហើយអត្រានៃការបញ្ចេញអាំងស៊ុយលីនពីណាណូភាគល្អិតត្រូវបានគណនាពីសមាមាត្រនៃអាំងស៊ុយលីនសេរីដែលបញ្ចេញទៅនឹងអាំងស៊ុយលីនសរុបដែលរុំព័ទ្ធក្នុងណាណូភាគល្អិត (សមីការ 3)។
កោសិកា HepG2 នៃខ្សែកោសិកាមហារីកថ្លើមកោសិការបស់មនុស្សត្រូវបានដាំដុះក្នុងចានដែលមានអង្កត់ផ្ចិត 60 មីលីម៉ែត្រដោយប្រើឧបករណ៍ផ្ទុក Modified Eagle's Medium (DMEM) របស់ Dulbecco ដែលមានផ្ទុកសេរ៉ូមគោគភ៌ 10% ប៉េនីស៊ីលីន 100 IU/mL និងស្ទ្រីបតូម៉ីន 100 μg/mL29។ ការដាំដុះត្រូវបានរក្សានៅសីតុណ្ហភាព 37°C សំណើមដែលទាក់ទង 95% និង CO2 5%។ សម្រាប់ការវាស់ស្ទង់ការស្រូបយក កោសិកា HepG2 ត្រូវបានសាបព្រោះក្នុងអត្រា 1 × 105 កោសិកា/មីលីលីត្រ ទៅលើប្រព័ន្ធស្លាយបន្ទប់ Nunc Lab-Tek 8 រន្ធ (Thermo Fisher, NY, USA)។ សម្រាប់ការវាស់ស្ទង់ជាតិពុលកោសិកា ពួកវាត្រូវបានសាបព្រោះក្នុងចាន 96 រន្ធ (Corning, NY, USA) ក្នុងដង់ស៊ីតេ 5 × 104 កោសិកា/មីលីលីត្រ។
ការវិភាគ MTT ត្រូវបានប្រើដើម្បីវាយតម្លៃភាពពុលកោសិកានៃអាំងស៊ុយលីន NPs30 ដែលទើបរៀបចំថ្មីៗ និងខ្សោះជាតិទឹក។ កោសិកា HepG2 ត្រូវបានសាបព្រោះក្នុងចាន 96-well ក្នុងដង់ស៊ីតេ 5 × 104 កោសិកា/mL ហើយដាំដុះរយៈពេល 7 ថ្ងៃមុនពេលធ្វើតេស្ត។ អាំងស៊ុយលីន NPs ត្រូវបានពនលាយទៅនឹងកំហាប់ផ្សេងៗ (50 ទៅ 500 μg/mL) នៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុកវប្បធម៌ ហើយបន្ទាប់មកចាក់ចូលទៅក្នុងកោសិកា។ បន្ទាប់ពីការភ្ញាស់រយៈពេល 24 ម៉ោង កោសិកាត្រូវបានលាងសម្អាត 3 ដងជាមួយ PBS ហើយភ្ញាស់ជាមួយឧបករណ៍ផ្ទុកដែលមាន MTT 0.5 mg/ml រយៈពេល 4 ម៉ោងបន្ថែម។ ភាពពុលកោសិកាត្រូវបានវាយតម្លៃដោយការវាស់ការកាត់បន្ថយអង់ស៊ីមនៃ tetrazolium MTT ពណ៌លឿងទៅជា formazan ពណ៌ស្វាយនៅ 570 nm ដោយប្រើឧបករណ៍អានចានវិសាលគម Tecan infinite M200 pro (Tecan, Männedorf, ស្វីស)។
ប្រសិទ្ធភាពនៃការស្រូបយកកោសិការបស់ NPs ត្រូវបានសាកល្បងដោយមីក្រូទស្សន៍ស្កេនឡាស៊ែរខនហ្វូកាល់ និងការវិភាគស៊ីតូម៉ែត្រីលំហូរ។ អណ្តូងនីមួយៗនៃប្រព័ន្ធស្លាយបន្ទប់ Nunc Lab-Tek ត្រូវបានព្យាបាលដោយ FITC-insulin ឥតគិតថ្លៃ NPs ដែលផ្ទុកដោយអាំងស៊ុយលីន FITC ហើយបានបង្កើតឡើងវិញនូវ 25 μg/mL នៃ FITC-insulin NPs ដែលខ្សោះជាតិទឹកក្នុងកំហាប់ដូចគ្នា និងភ្ញាស់រយៈពេល 4 ម៉ោង។ កោសិកាត្រូវបានលាងសម្អាត 3 ដងជាមួយ PBS និងជួសជុលជាមួយ paraformaldehyde 4%។ ស្នូលត្រូវបានប្រឡាក់ដោយ 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)។ ការកំណត់ទីតាំងអាំងស៊ុយលីនត្រូវបានគេសង្កេតឃើញដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍ខនហ្វូកាល់ស្កេនឡាស៊ែរ Olympus FV1000/ពីរហ្វូតុង (Olympus, ទីក្រុង Shinjuku, តូក្យូ, ប្រទេសជប៉ុន)។ សម្រាប់ការវិភាគស៊ីតូម៉ែត្រីលំហូរ កំហាប់ដូចគ្នានៃ 10 μg/mL FITC-insulin ឥតគិតថ្លៃ NPs ដែលផ្ទុកដោយអាំងស៊ុយលីន FITC និង FITC-insulin NPs ដែលខ្សោះជាតិទឹកដែលរលាយត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងចាន 96 អណ្តូង។ ត្រូវបានសាបព្រួសជាមួយកោសិកា HepG2 ហើយភ្ញាស់រយៈពេល 4 ម៉ោង។ បន្ទាប់ពីការភ្ញាស់រយៈពេល 4 ម៉ោង កោសិកាត្រូវបានយកចេញ និងលាងសម្អាត 3 ដងជាមួយ FBS។ កោសិកា 5 × 104 ក្នុងមួយគំរូត្រូវបានវិភាគដោយឧបករណ៍វាស់លំហូរ BD LSR II (BD, Franklin Lakes, New Jersey, សហរដ្ឋអាមេរិក)។
តម្លៃទាំងអស់ត្រូវបានបង្ហាញជាមធ្យម ± គម្លាតស្តង់ដារ។ ការប្រៀបធៀបរវាងក្រុមទាំងអស់ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើ ANOVA មួយផ្លូវ ឬ t-test ដោយ IBM SPSS Statistics 26 សម្រាប់ Mac (IBM, Endicott, ញូវយ៉ក, សហរដ្ឋអាមេរិក) ហើយ p < 0.05 ត្រូវបានចាត់ទុកថាមានសារៈសំខាន់ខាងស្ថិតិ។
ការសិក្សានេះបង្ហាញពីភាពបត់បែន និងសមត្ថភាពនៃការសម្ងួតដោយបាញ់ថ្នាំ ដើម្បីធ្វើឱ្យភាគល្អិតណាណូ chitosan/TPP/insulin ដែលមានតំណភ្ជាប់ឆ្លងកាត់ស្ងួត ជាមួយនឹងការកសាងឡើងវិញបានល្អជាងបើប្រៀបធៀបទៅនឹងវិធីសាស្ត្រសម្ងួតបង្កកស្តង់ដារដោយប្រើភ្នាក់ងារបង្កើនបរិមាណ ឬសមត្ថភាពការពារភាពត្រជាក់ និងសមត្ថភាពផ្ទុកខ្ពស់ជាង។ ភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងបានផ្តល់ទំហំភាគល្អិតជាមធ្យម 318 nm និងប្រសិទ្ធភាពរុំព័ទ្ធ 99.4%។ លទ្ធផល SEM និង FTIR បន្ទាប់ពីការខ្សោះជាតិទឹកបានបង្ហាញថារចនាសម្ព័ន្ធស្វ៊ែរត្រូវបានរក្សាតែនៅក្នុង NPs សម្ងួតដោយបាញ់ថ្នាំដែលមាន និងគ្មាន mannitol និង lyophilized ជាមួយ mannitol ប៉ុន្តែ NPs lyophilized ដោយគ្មាន mannitol ត្រូវបានរលួយក្នុងអំឡុងពេលខ្សោះជាតិទឹក។ នៅក្នុងការធ្វើតេស្តសមត្ថភាពកសាងឡើងវិញ ភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនដែលសម្ងួតដោយបាញ់ថ្នាំដោយគ្មាន mannitol បានបង្ហាញទំហំភាគល្អិតមធ្យមតូចបំផុត និងបន្ទុកខ្ពស់បំផុតនៅពេលកសាងឡើងវិញ។ ឥរិយាបថនៃការបញ្ចេញ NPs ខ្សោះជាតិទឹកទាំងអស់នេះបានបង្ហាញថា ពួកវាត្រូវបានបញ្ចេញយ៉ាងឆាប់រហ័សនៅក្នុងដំណោះស្រាយនៃ pH = 2.5 និង pH = 7 ហើយមានស្ថេរភាពខ្លាំងនៅក្នុងដំណោះស្រាយនៃ pH = 6.5។ បើប្រៀបធៀបទៅនឹង NPs ខ្សោះជាតិទឹកដែលរលាយឡើងវិញផ្សេងទៀត NPs ការសម្ងួតដោយបាញ់ដោយគ្មាន mannitol បានបង្ហាញការបញ្ចេញលឿនបំផុត។ លទ្ធផលនេះគឺស្របនឹងអ្វីដែលសង្កេតឃើញនៅក្នុងការវាស់ស្ទង់ការស្រូបយកកោសិកា ដោយសារ NPs សម្ងួតដោយបាញ់ក្នុងករណីដែលគ្មាន mannitol ស្ទើរតែរក្សាប្រសិទ្ធភាពស្រូបយកកោសិកានៃ NPs ដែលទើបរៀបចំថ្មីៗបានទាំងស្រុង។ លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថា ភាគល្អិតណាណូអាំងស៊ុយលីនស្ងួតដែលរៀបចំដោយការសម្ងួតដោយបាញ់ដោយគ្មាន mannitol គឺស័ក្តិសមបំផុតសម្រាប់ដំណើរការបន្ថែមទៀតទៅជាទម្រង់ដូសគ្មានជាតិទឹកផ្សេងទៀត ដូចជាថ្នាំគ្រាប់លេប ឬខ្សែភាពយន្តជីវស្អិត។
ដោយសារតែបញ្ហាកម្មសិទ្ធិបញ្ញា សំណុំទិន្នន័យដែលបង្កើត និង/ឬវិភាគក្នុងអំឡុងពេលសិក្សាបច្ចុប្បន្នមិនមានជាសាធារណៈទេ ប៉ុន្តែអាចរកបានពីអ្នកនិពន្ធរៀងៗខ្លួន តាមការស្នើសុំសមហេតុផល។
Kagan, A. ជំងឺទឹកនោមផ្អែមប្រភេទទី 2៖ ប្រភពដើមសង្គម និងវិទ្យាសាស្ត្រ ផលវិបាកផ្នែកវេជ្ជសាស្ត្រ និងផលវិបាកសម្រាប់អ្នកជំងឺ និងអ្នកដទៃ។ (McFarlane, 2009)។
Singh, AP, Guo, Y., Singh, A., Xie, W. & Jiang, P. ការវិវឌ្ឍន៍នៃការរុំព័ទ្ធអាំងស៊ុយលីន៖ តើការគ្រប់គ្រងតាមមាត់ឥឡូវនេះអាចធ្វើទៅបានទេ? J. Pharmacy.bio-pharmacy.reservoir.1, 74–92 (2019)។
Wong, CY, Al-Salami, H. & Dass, CR ការរីកចម្រើនថ្មីៗនៅក្នុងប្រព័ន្ធចែកចាយ liposome ដែលផ្ទុកអាំងស៊ុយលីនតាមមាត់សម្រាប់ការព្យាបាលជំងឺទឹកនោមផ្អែម។ Interpretation.J. Pharmacy.549, 201–217 (2018)។