អាស៊ីតប្រូពីយ៉ូនិក (PPA) ដែលជាសារធាតុប្រឆាំងនឹងផ្សិត និងជាសារធាតុបន្ថែមក្នុងរបបអាហារទូទៅ ត្រូវបានបង្ហាញថាបណ្តាលឱ្យមានការវិវឌ្ឍន៍សរសៃប្រសាទមិនប្រក្រតីចំពោះសត្វកណ្តុរដែលអមដោយមុខងារមិនប្រក្រតីនៃក្រពះពោះវៀន ដែលអាចបណ្តាលមកពីជំងឺពោះវៀនមិនប្រក្រតី។ ទំនាក់ទំនងរវាងការប៉ះពាល់នឹង PPA ក្នុងរបបអាហារ និងជំងឺពោះវៀនមិនប្រក្រតីនៃអតិសុខុមប្រាណត្រូវបានគេណែនាំ ប៉ុន្តែមិនទាន់ត្រូវបានស៊ើបអង្កេតដោយផ្ទាល់នៅឡើយទេ។ នៅទីនេះ យើងបានស៊ើបអង្កេតការផ្លាស់ប្តូរដែលទាក់ទងនឹង PPA នៅក្នុងសមាសភាពអតិសុខុមប្រាណក្នុងពោះវៀន ដែលអាចនាំឱ្យមានជំងឺពោះវៀនមិនប្រក្រតី។ អតិសុខុមប្រាណក្នុងពោះវៀនរបស់សត្វកណ្តុរដែលបានផ្តល់អាហារដែលមិនបានព្យាបាល (n=9) និងរបបអាហារដែលសម្បូរទៅដោយ PPA (n=13) ត្រូវបានធ្វើលំដាប់ដោយប្រើការធ្វើលំដាប់មេតាណូមិករយៈពេលវែង ដើម្បីវាយតម្លៃភាពខុសគ្នានៃសមាសភាពអតិសុខុមប្រាណ និងផ្លូវមេតាបូលីសរបស់បាក់តេរី។ PPA ក្នុងរបបអាហារត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការកើនឡើងនៃភាពសម្បូរបែបនៃពពួកបាក់តេរីសំខាន់ៗ រួមទាំងប្រភេទ Bacteroides, Prevotella និង Ruminococcus ជាច្រើន ដែលសមាជិករបស់វាពីមុនត្រូវបានចោទប្រកាន់ក្នុងការផលិត PPA។ អតិសុខុមប្រាណក្នុងកណ្តុរដែលប៉ះពាល់នឹង PPA ក៏មានផ្លូវជាច្រើនទៀតដែលទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ lipid និងជីវសំយោគអរម៉ូនស្តេរ៉ូអ៊ីតផងដែរ។ លទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថា PPA អាចផ្លាស់ប្តូរអតិសុខុមប្រាណក្នុងពោះវៀន និងផ្លូវមេតាបូលីសដែលពាក់ព័ន្ធរបស់វា។ ការផ្លាស់ប្តូរទាំងនេះដែលសង្កេតឃើញបង្ហាញថា សារធាតុរក្សាទុកដែលត្រូវបានចាត់ថ្នាក់ថាមានសុវត្ថិភាពសម្រាប់ការប្រើប្រាស់ អាចមានឥទ្ធិពលលើសមាសភាពនៃមីក្រូជីវសាស្រ្តពោះវៀន និងជាលទ្ធផល ប៉ះពាល់ដល់សុខភាពមនុស្ស។ ក្នុងចំណោមពួកវា P, G ឬ S ត្រូវបានជ្រើសរើសអាស្រ័យលើកម្រិតចំណាត់ថ្នាក់ដែលកំពុងត្រូវបានវិភាគ។ ដើម្បីកាត់បន្ថយផលប៉ះពាល់នៃការចាត់ថ្នាក់វិជ្ជមានមិនពិត កម្រិតនៃភាពសម្បូរបែបដែលទាក់ទងអប្បបរមានៃ 1e-4 (1/10,000 ការអាន) ត្រូវបានអនុម័ត។ មុនពេលវិភាគស្ថិតិ ភាពសម្បូរបែបដែលទាក់ទងដែលរាយការណ៍ដោយ Bracken (fraction_total_reads) ត្រូវបានបំលែងដោយប្រើការបំលែងសមាមាត្រឡូការកណ្តាល (CLR) (Aitchison, 1982)។ វិធីសាស្ត្រ CLR ត្រូវបានជ្រើសរើសសម្រាប់ការបំលែងទិន្នន័យ ពីព្រោះវាមិនមានមាត្រដ្ឋានប្រែប្រួល និងគ្រប់គ្រាន់សម្រាប់សំណុំទិន្នន័យមិនរាយប៉ាយ (Gloor et al., 2017)។ ការបំលែង CLR ប្រើលោការីតធម្មជាតិ។ ទិន្នន័យរាប់ដែលរាយការណ៍ដោយ Bracken ត្រូវបានធ្វើឱ្យមានលក្ខណៈធម្មតាដោយប្រើកន្សោមឡូការទាក់ទង (RLE) (Anders and Huber, 2010)។ តួលេខត្រូវបានបង្កើតដោយប្រើការរួមបញ្ចូលគ្នានៃ matplotlib v. 3.7.1, seaborn v. 3.7.2 និងលោការីតលំដាប់ (Gloor et al., 2017)។ ០.១២.២ និង stantanotations v. ០.៥.០ (Hunter, 2007; Waskom, 2021; Charlier et al., 2022)។ សមាមាត្រ Bacillus/Bacteroidetes ត្រូវបានគណនាសម្រាប់គំរូនីមួយៗដោយប្រើចំនួនបាក់តេរីធម្មតា។ តម្លៃដែលបានរាយការណ៍នៅក្នុងតារាងត្រូវបានបង្គត់ទៅ ៤ ខ្ទង់ទសភាគ។ សន្ទស្សន៍ភាពចម្រុះ Simpson ត្រូវបានគណនាដោយប្រើស្គ្រីប alpha_diversity.py ដែលមាននៅក្នុងកញ្ចប់ KrakenTools v. 1.2 (Lu et al., 2022)។ របាយការណ៍ Bracken ត្រូវបានផ្តល់ជូននៅក្នុងស្គ្រីប ហើយសន្ទស្សន៍ Simpson “Si” ត្រូវបានផ្តល់ជូនសម្រាប់ប៉ារ៉ាម៉ែត្រ -an។ ភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែបត្រូវបានកំណត់ថាជាភាពខុសគ្នា CLR មធ្យម ≥ 1 ឬ ≤ -1។ ភាពខុសគ្នា CLR មធ្យម ±1 បង្ហាញពីការកើនឡើង 2.7 ដងនៃភាពសម្បូរបែបនៃប្រភេទគំរូ។ សញ្ញា (+/-) បង្ហាញថាតើ taxon មានច្រើននៅក្នុងគំរូ PPA និងគំរូត្រួតពិនិត្យរៀងៗខ្លួនឬអត់។ សារៈសំខាន់ត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើតេស្ត Mann-Whitney U (Virtanen et al., 2020)។ Statsmodels v. 0.14 (Benjamini និង Hochberg, 1995; Seabold និង Perktold, 2010) ត្រូវបានប្រើ ហើយនីតិវិធី Benjamini-Hochberg ត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីកែតម្រូវសម្រាប់ការធ្វើតេស្តច្រើន។ តម្លៃ p ដែលបានកែតម្រូវ ≤ 0.05 ត្រូវបានប្រើជាកម្រិតសម្រាប់កំណត់សារៈសំខាន់ស្ថិតិ។
មីក្រូប៊ីយ៉ូមរបស់មនុស្សត្រូវបានគេហៅថាជា "សរីរាង្គចុងក្រោយនៃរាងកាយ" ហើយដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងសុខភាពមនុស្ស (Baquero និង Nombela, 2012)។ ជាពិសេស មីក្រូប៊ីយ៉ូមពោះវៀនត្រូវបានគេទទួលស្គាល់ចំពោះឥទ្ធិពល និងតួនាទីទូទាំងប្រព័ន្ធរបស់វានៅក្នុងមុខងារសំខាន់ៗជាច្រើន។ បាក់តេរីចម្រុះមានច្រើននៅក្នុងពោះវៀន ដោយកាន់កាប់ទីផ្សារអេកូឡូស៊ីច្រើន ប្រើប្រាស់សារធាតុចិញ្ចឹម និងប្រកួតប្រជែងជាមួយភ្នាក់ងារបង្ករោគដែលមានសក្តានុពល (Jandhyala et al., 2015)។ សមាសធាតុបាក់តេរីចម្រុះនៃមីក្រូប៊ីយ៉ូតាពោះវៀនមានសមត្ថភាពផលិតសារធាតុចិញ្ចឹមសំខាន់ៗដូចជាវីតាមីន និងជំរុញការរំលាយអាហារ (Rowland et al., 2018)។ សារធាតុរំលាយអាហាររបស់បាក់តេរីក៏ត្រូវបានបង្ហាញថាមានឥទ្ធិពលលើការអភិវឌ្ឍជាលិកា និងបង្កើនផ្លូវមេតាប៉ូលីស និងភាពស៊ាំ (Heijtz et al., 2011; Yu et al., 2022)។ សមាសភាពនៃមីក្រូប៊ីយ៉ូមពោះវៀនរបស់មនុស្សមានភាពចម្រុះខ្លាំង ហើយអាស្រ័យលើកត្តាហ្សែន និងបរិស្ថានដូចជារបបអាហារ ភេទ ថ្នាំ និងស្ថានភាពសុខភាព (Kumbhare et al., 2019)។
របបអាហាររបស់ម្តាយគឺជាសមាសធាតុសំខាន់មួយនៃការលូតលាស់របស់ទារក និងទារកទើបនឹងកើត និងជាប្រភពនៃសមាសធាតុដែលអាចជះឥទ្ធិពលដល់ការលូតលាស់ (Bazer et al., 2004; Innis, 2014)។ សមាសធាតុមួយក្នុងចំណោមសមាសធាតុដែលគួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ទាំងនោះគឺអាស៊ីតប្រូភីយ៉ូនិក (PPA) ដែលជាផលិតផលរងនៃអាស៊ីតខ្លាញ់ខ្សែខ្លីដែលទទួលបានពីដំណើរការ fermentation របស់បាក់តេរី និងជាសារធាតុបន្ថែមអាហារ (den Besten et al., 2013)។ PPA មានលក្ខណៈសម្បត្តិប្រឆាំងនឹងបាក់តេរី និងប្រឆាំងនឹងផ្សិត ដូច្នេះហើយត្រូវបានគេប្រើជាសារធាតុរក្សាទុកអាហារ និងក្នុងកម្មវិធីឧស្សាហកម្មដើម្បីទប់ស្កាត់ការលូតលាស់ផ្សិត និងបាក់តេរី (Wemmenhove et al., 2016)។ PPA មានឥទ្ធិពលខុសៗគ្នានៅក្នុងជាលិកាផ្សេងៗគ្នា។ នៅក្នុងថ្លើម PPA មានឥទ្ធិពលប្រឆាំងនឹងការរលាកដោយប៉ះពាល់ដល់ការបញ្ចេញមតិ cytokine នៅក្នុង macrophages (Kawasoe et al., 2022)។ ឥទ្ធិពលនិយតកម្មនេះក៏ត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងកោសិកាភាពស៊ាំផ្សេងទៀតផងដែរ ដែលនាំឱ្យមានការថយចុះនៃការរលាក (Haase et al., 2021)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ឥទ្ធិពលផ្ទុយគ្នាត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងខួរក្បាល។ ការសិក្សាពីមុនបានបង្ហាញថា ការប៉ះពាល់នឹង PPA បង្កឱ្យមានអាកប្បកិរិយាដូចជំងឺអូទីសឹមចំពោះសត្វកណ្ដុរ (El-Ansary et al., 2012)។ ការសិក្សាផ្សេងទៀតបានបង្ហាញថា PPA អាចបង្កឱ្យមានជំងឺ gliosis និងធ្វើឱ្យសកម្មនូវផ្លូវរលាកនៅក្នុងខួរក្បាល (Abdelli et al., 2019)។ ដោយសារតែ PPA ជាអាស៊ីតខ្សោយ វាអាចសាយភាយតាមរយៈភ្នាសពោះវៀនចូលទៅក្នុងចរន្តឈាម ហើយដូច្នេះឆ្លងកាត់របាំងរឹតត្បិត រួមទាំងរបាំងឈាម-ខួរក្បាល ក៏ដូចជាសុក (Stinson et al., 2019) ដែលបង្ហាញពីសារៈសំខាន់នៃ PPA ជាសារធាតុរំលាយអាហារដែលផលិតដោយបាក់តេរី។ ទោះបីជាតួនាទីដ៏មានសក្តានុពលរបស់ PPA ជាកត្តាហានិភ័យសម្រាប់ជំងឺអូទីសឹមកំពុងស្ថិតក្រោមការស៊ើបអង្កេតក៏ដោយ ផលប៉ះពាល់របស់វាទៅលើបុគ្គលដែលមានជំងឺអូទីសឹមអាចពង្រីកហួសពីការបង្កឱ្យមានភាពខុសគ្នានៃសរសៃប្រសាទ។
រោគសញ្ញានៃក្រពះពោះវៀនដូចជារាគ និងទល់លាមក គឺជារឿងធម្មតាចំពោះអ្នកជំងឺដែលមានជំងឺវិវឌ្ឍន៍សរសៃប្រសាទ (Cao et al., 2021)។ ការសិក្សាពីមុនបានបង្ហាញថា មីក្រូជីវសាស្រ្តរបស់អ្នកជំងឺដែលមានជំងឺអូទីសឹម (ASD) ខុសពីបុគ្គលដែលមានសុខភាពល្អ ដែលបង្ហាញពីវត្តមាននៃជំងឺបាក់តេរីពោះវៀនមិនប្រក្រតី (Finegold et al., 2010)។ ស្រដៀងគ្នានេះដែរ លក្ខណៈមីក្រូជីវសាស្រ្តរបស់អ្នកជំងឺដែលមានជំងឺរលាកពោះវៀន ធាត់ ជំងឺភ្លេចភ្លាំងជាដើម ក៏ខុសពីលក្ខណៈរបស់បុគ្គលដែលមានសុខភាពល្អដែរ (Turnbaugh et al., 2009; Vogt et al., 2017; Henke et al., 2019)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ រហូតមកដល់បច្ចុប្បន្ន មិនមានទំនាក់ទំនងមូលហេតុណាមួយត្រូវបានបង្កើតឡើងរវាងមីក្រូជីវសាស្រ្តពោះវៀន និងជំងឺសរសៃប្រសាទ ឬរោគសញ្ញានោះទេ (Yap et al., 2021) ទោះបីជាប្រភេទបាក់តេរីជាច្រើនត្រូវបានគេគិតថាដើរតួនាទីក្នុងស្ថានភាពជំងឺមួយចំនួនទាំងនេះក៏ដោយ។ ឧទាហរណ៍ Akkermansia, Bacteroides, Clostridium, Lactobacillus, Desulfovibrio និងពូជដទៃទៀត មានច្រើននៅក្នុងមីក្រូជីវតារបស់អ្នកជំងឺដែលមានជំងឺអូទីសឹម (Tomova et al., 2015; Golubeva et al., 2017; Cristiano et al., 2018; Zurita et al., 2020)។ ជាពិសេស ប្រភេទសត្វមួយចំនួននៃពូជទាំងនេះត្រូវបានគេដឹងថាមានហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងការផលិត PPA (Reichardt et al., 2014; Yun និង Lee, 2016; Zhang et al., 2019; Baur និង Dürre, 2023)។ ដោយសារតែលក្ខណៈសម្បត្តិប្រឆាំងនឹងមេរោគរបស់ PPA ការបង្កើនភាពសម្បូរបែបរបស់វាអាចមានប្រយោជន៍សម្រាប់ការលូតលាស់របស់បាក់តេរីដែលផលិត PPA (Jacobson et al., 2018)។ ដូច្នេះ បរិស្ថានសម្បូរទៅដោយ PFA អាចនាំឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងមីក្រូជីវតាពោះវៀន រួមទាំងភ្នាក់ងារបង្ករោគក្រពះពោះវៀន ដែលអាចជាកត្តាដែលអាចនាំឱ្យមានរោគសញ្ញាក្រពះពោះវៀន។
សំណួរស្នូលមួយនៅក្នុងការស្រាវជ្រាវមីក្រូប៊ីយ៉ូម គឺថាតើភាពខុសគ្នានៃសមាសភាពមីក្រូប៊ីយ៉ូមជាមូលហេតុ ឬជារោគសញ្ញានៃជំងឺមូលដ្ឋានដែរឬទេ។ ជំហានដំបូងឆ្ពោះទៅរកការបញ្ជាក់ពីទំនាក់ទំនងស្មុគស្មាញរវាងរបបអាហារ មីក្រូប៊ីយ៉ូមពោះវៀន និងជំងឺសរសៃប្រសាទ គឺត្រូវវាយតម្លៃពីផលប៉ះពាល់នៃរបបអាហារលើសមាសភាពមីក្រូប៊ីយ៉ូម។ ចំពោះគោលបំណងនេះ យើងបានប្រើលំដាប់មេតាហ្គេណូមិកដែលបានអានជាយូរមកហើយ ដើម្បីប្រៀបធៀបមីក្រូប៊ីយ៉ូមពោះវៀនរបស់កូនចៅកណ្តុរដែលបានផ្តល់ចំណីដែលសម្បូរទៅដោយ PPA ឬរបបអាហារដែលខ្វះ PPA។ កូនចៅត្រូវបានផ្តល់ចំណីដូចគ្នានឹងម្តាយរបស់ពួកគេ។ យើងបានសន្និដ្ឋានថា របបអាហារដែលសម្បូរទៅដោយ PPA នឹងបណ្តាលឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរសមាសភាពមីក្រូប៊ីយ៉ូមពោះវៀន និងផ្លូវមុខងារមីក្រូប៊ីយ៉ូម ជាពិសេសរបបអាហារដែលទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ PPA និង/ឬការផលិត PPA។
ការសិក្សានេះបានប្រើប្រាស់កណ្ដុរប្តូរហ្សែន FVB/N-Tg(GFAP-GFP)14Mes/J (Jackson Laboratories) ដែលបញ្ចេញប្រូតេអ៊ីន fluorescent ពណ៌បៃតង (GFP) លើសកម្រិត ក្រោមការគ្រប់គ្រងរបស់ប្រូម៉ូទ័រ GFAP ជាក់លាក់ glia ដោយអនុវត្តតាមគោលការណ៍ណែនាំរបស់គណៈកម្មាធិការថែទាំ និងប្រើប្រាស់សត្វនៃសាកលវិទ្យាល័យ Central Florida (UCF-IACUC) (លេខអនុញ្ញាតប្រើប្រាស់សត្វ៖ PROTO202000002)។ បន្ទាប់ពីផ្ដាច់ដោះ កណ្ដុរត្រូវបានដាក់ជាលក្ខណៈបុគ្គលក្នុងទ្រុង ដោយមានកណ្ដុរចំនួន 1-5 ក្បាលនៃភេទនីមួយៗក្នុងមួយទ្រុង។ កណ្ដុរត្រូវបានផ្តល់ចំណីតាមអំពើចិត្តជាមួយនឹងរបបអាហារត្រួតពិនិត្យដែលបានបន្សុទ្ធ (របបអាហារស្តង់ដារដែលបានកែប្រែ ខ្លាញ់ 16 kcal%) ឬរបបអាហារបន្ថែមសូដ្យូម propionate (របបអាហារស្តង់ដារដែលបានកែប្រែ ខ្លាញ់ 16 kcal% មានផ្ទុកសូដ្យូម propionate 5,000 ppm)។ បរិមាណសូដ្យូម propionate ដែលប្រើគឺស្មើនឹង 5,000 mg PFA/kg ទម្ងន់អាហារសរុប។ នេះគឺជាកំហាប់ខ្ពស់បំផុតនៃ PPA ដែលត្រូវបានអនុម័តសម្រាប់ប្រើជាសារធាតុរក្សាទុកអាហារ។ ដើម្បីរៀបចំសម្រាប់ការសិក្សានេះ កណ្ដុរមេត្រូវបានផ្តល់ចំណីទាំងពីរប្រភេទរយៈពេល ៤ សប្តាហ៍មុនពេលរួមរ័ក ហើយបន្តពេញមួយការមានផ្ទៃពោះរបស់មេ។ កណ្ដុរកូន [កណ្ដុរ ២២ ក្បាល កណ្ដុរត្រួតពិនិត្យ ៩ ក្បាល (ឈ្មោល ៦ ញី ៣) និងកណ្ដុរ PPA ១៣ ក្បាល (ឈ្មោល ៤ ញី ៩)] ត្រូវបានផ្តាច់ដោះ ហើយបន្ទាប់មកបន្តផ្តល់ចំណីដូចគ្នានឹងមេរយៈពេល ៥ ខែ។ កណ្ដុរកូនត្រូវបានសម្លាប់នៅអាយុ ៥ ខែ ហើយមាតិកាលាមករបស់វាត្រូវបានប្រមូល និងរក្សាទុកដំបូងក្នុងបំពង់មីក្រូសេនទ្រីហ្វុយ ១.៥ មីលីលីត្រ នៅសីតុណ្ហភាព -២០°C ហើយបន្ទាប់មកផ្ទេរទៅទូរទឹកកកដែលមានសីតុណ្ហភាព -៨០°C រហូតដល់ DNA របស់មេត្រូវបានអស់ ហើយអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកមីក្រូត្រូវបានស្រង់ចេញ។
ឌីអិនអេរបស់ម៉ាស៊ីនត្រូវបានយកចេញតាមពិធីការដែលបានកែប្រែ (Charalampous et al., 2019)។ ជាសង្ខេប មាតិកាលាមកត្រូវបានផ្ទេរទៅ InhibitEX 500 µl (Qiagen, Cat#/ID: 19593) ហើយរក្សាទុកក្នុងទូរទឹកកក។ ដំណើរការគ្រាប់លាមកអតិបរមា 1-2 គ្រាប់ក្នុងមួយការស្រង់ចេញ។ បន្ទាប់មក មាតិកាលាមកត្រូវបានធ្វើឱ្យដូចគ្នាដោយមេកានិចដោយប្រើឧបករណ៍ស្រូបប្លាស្ទិកនៅខាងក្នុងបំពង់ ដើម្បីបង្កើតជាល្បាយ។ បង្វិលសំណាកនៅ 10,000 RCF រយៈពេល 5 នាទី ឬរហូតដល់សំណាកបានរលាយ បន្ទាប់មកបឺតយកសារធាតុរាវលើស ហើយរំលាយគ្រាប់ឡើងវិញក្នុង 250 µl 1× PBS។ បន្ថែមដំណោះស្រាយ saponin 4.4% ចំនួន 250 µl (TCI លេខផលិតផល S0019) ទៅក្នុងសំណាកជាសាប៊ូបោកខោអាវដើម្បីបន្ធូរភ្នាសកោសិកា eukaryotic ។ សំណាកត្រូវបានលាយបញ្ចូលគ្នាថ្នមៗរហូតដល់រលោង និងភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 10 នាទី។ បន្ទាប់មក ដើម្បីរំខានដល់កោសិកា eukaryotic ទឹកដែលគ្មាននុយក្លេអាសចំនួន 350 μl ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងគំរូ ភ្ញាស់រយៈពេល 30 វិនាទី ហើយបន្ទាប់មក NaCl 5 M ចំនួន 12 μl ត្រូវបានបន្ថែម។ បន្ទាប់មកគំរូត្រូវបានបង្វិលនៅ 6000 RCF រយៈពេល 5 នាទី។ ស្រូបយកសារធាតុរាវខាងលើ ហើយរំលាយគ្រាប់ឡើងវិញក្នុង 1X PBS ចំនួន 100 μl។ ដើម្បីយក DNA របស់ម៉ាស៊ីនចេញ សូមបន្ថែមសារធាតុ HL-SAN ចំនួន 100 μl (NaCl 12.8568 ក្រាម, MgCl2 1M 4 មីលីលីត្រ, ទឹកដែលគ្មាននុយក្លេអាស 36 មីលីលីត្រ) និងអង់ស៊ីម HL-SAN ចំនួន 10 μl (ArticZymes P/N 70910-202)។ សំណាកត្រូវបានលាយបញ្ចូលគ្នាយ៉ាងហ្មត់ចត់ដោយប្រើបំពង់បឺត ហើយដាក់ក្នុងម៉ាស៊ីនភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 30 នាទី ក្នុងល្បឿន 800 rpm លើម៉ាស៊ីនលាយ Eppendorf™ ThermoMixer C។ បន្ទាប់ពីភ្ញាស់រួច ត្រូវបង្វិលនៅ 6000 RCF រយៈពេល 3 នាទី ហើយលាងសម្អាតពីរដងជាមួយសារធាតុ PBS 1X កំហាប់ 800 µl និង 1000 µl។ ជាចុងក្រោយ ដាក់គ្រាប់ថ្នាំឡើងវិញក្នុងសារធាតុ PBS 1X កំហាប់ 100 µl។
ឌីអិនអេសរុបរបស់បាក់តេរីត្រូវបានញែកចេញដោយប្រើឧបករណ៍បន្សុទ្ធឌីអិនអេហ្សែន Monarch របស់ New England Biolabs (New England Biolabs, Ipswich, MA, Cat# T3010L)។ នីតិវិធីប្រតិបត្តិការស្តង់ដារដែលភ្ជាប់មកជាមួយឧបករណ៍នេះត្រូវបានកែប្រែបន្តិចបន្តួច។ ភ្ញាស់ និងរក្សាទឹកដែលគ្មាននុយក្លេអាសនៅសីតុណ្ហភាព 60°C មុនពេលប្រតិបត្តិការសម្រាប់ការសម្អាតចុងក្រោយ។ បន្ថែម Proteinase K ចំនួន 10 µl និង RNase A ចំនួន 3 µl ទៅក្នុងគំរូនីមួយៗ។ បន្ទាប់មកបន្ថែមសារធាតុរំលាយកោសិកាចំនួន 100 µl ហើយលាយថ្នមៗ។ បន្ទាប់មកគំរូត្រូវបានភ្ញាស់ក្នុងម៉ាស៊ីនលាយ Eppendorf™ ThermoMixer C នៅសីតុណ្ហភាព 56°C និង 1400 rpm រយៈពេលយ៉ាងហោចណាស់ 1 ម៉ោង និងរហូតដល់ 3 ម៉ោង។ គំរូដែលបានភ្ញាស់ត្រូវបានបង្វិលនៅ 12,000 RCF រយៈពេល 3 នាទី ហើយសារធាតុរាវខាងលើពីគំរូនីមួយៗត្រូវបានផ្ទេរទៅបំពង់មីក្រូបង្វិលដាច់ដោយឡែក 1.5 mL ដែលមានផ្ទុកដំណោះស្រាយចង 400 µL។ បន្ទាប់មកបំពង់ទាំងនោះត្រូវបានបង្វិលដោយជីពចររយៈពេល 5-10 វិនាទីក្នុងចន្លោះពេល 1 វិនាទី។ ផ្ទេរមាតិការាវទាំងមូលនៃគំរូនីមួយៗ (ប្រហែល 600–700 µL) ទៅក្នុងប្រអប់តម្រងដែលដាក់ក្នុងបំពង់ប្រមូលទឹកហូរ។ បំពង់ទាំងនោះត្រូវបានបង្វិលក្នុងល្បឿន 1,000 RCF រយៈពេល 3 នាទីដើម្បីអនុញ្ញាតឱ្យ DNA ភ្ជាប់ដំបូង ហើយបន្ទាប់មកបង្វិលក្នុងល្បឿន 12,000 RCF រយៈពេល 1 នាទីដើម្បីយកសារធាតុរាវដែលនៅសេសសល់ចេញ។ ជួរឈរគំរូត្រូវបានផ្ទេរទៅបំពង់ប្រមូលថ្មី ហើយបន្ទាប់មកលាងសម្អាតពីរដង។ សម្រាប់ការលាងសម្អាតលើកដំបូង បន្ថែមសារធាតុរាវលាងសម្អាត 500 µL ទៅក្នុងបំពង់នីមួយៗ។ បញ្ច្រាសបំពង់ 3–5 ដង ហើយបន្ទាប់មកបង្វិលក្នុងល្បឿន 12,000 RCF រយៈពេល 1 នាទី។ ចាក់សារធាតុរាវចេញពីបំពង់ប្រមូល ហើយដាក់ប្រអប់តម្រងត្រឡប់ទៅក្នុងបំពង់ប្រមូលដដែលវិញ។ សម្រាប់ការលាងសម្អាតលើកទីពីរ បន្ថែមសារធាតុរាវលាងសម្អាត 500 µL ទៅក្នុងតម្រងដោយមិនចាំបាច់បញ្ច្រាស។ គំរូត្រូវបានបង្វិលក្នុងល្បឿន 12,000 RCF រយៈពេល 1 នាទី។ ផ្ទេរតម្រងទៅបំពង់ LoBind® ទំហំ 1.5 មីលីលីត្រ ហើយបន្ថែមទឹកដែលគ្មានជាតិនុយក្លេអាសដែលបានកំដៅមុនចំនួន 100 µL។ តម្រងត្រូវបានភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់រយៈពេល 1 នាទី ហើយបន្ទាប់មកបង្វិលនៅ 12,000 RCF រយៈពេល 1 នាទី។ DNA ដែលបានចម្រាញ់ត្រូវបានរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព -80°C។
កំហាប់ DNA ត្រូវបានវាស់វែងដោយប្រើឧបករណ៍វាស់ស្ទង់ Qubit™ 4.0 Fluorometer។ DNA ត្រូវបានរៀបចំដោយប្រើឧបករណ៍ Qubit™ 1X dsDNA High Sensitivity Kit (លេខប្រភេទ Q33231) ស្របតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត។ ការចែកចាយប្រវែងបំណែក DNA ត្រូវបានវាស់ដោយប្រើ Aglient™ 4150 ឬ 4200 TapeStation។ DNA ត្រូវបានរៀបចំដោយប្រើសារធាតុប្រតិកម្ម DNA Genomic Agilent™ (លេខប្រភេទ 5067-5366) និង Genomic DNA ScreenTape (លេខប្រភេទ 5067-5365)។ ការរៀបចំបណ្ណាល័យត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើឧបករណ៍វាស់ស្ទង់បាកូដ PCR រហ័ស Oxford Nanopore Technologies™ (ONT) (SQK-RPB004) ស្របតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត។ DNA ត្រូវបានធ្វើលំដាប់ដោយប្រើឧបករណ៍វាស់លំដាប់ ONT GridION™ Mk1 ជាមួយក្រឡាលំហូរ Min106D (R 9.4.1)។ ការកំណត់លំដាប់គឺ៖ ការហៅមូលដ្ឋានដែលមានភាពត្រឹមត្រូវខ្ពស់ តម្លៃ q អប្បបរមា 9 ការដំឡើងបាកូដ និងការកាត់បាកូដ។ គំរូត្រូវបានដាក់លំដាប់រយៈពេល 72 ម៉ោង បន្ទាប់ពីនោះទិន្នន័យការហៅទូរស័ព្ទមូលដ្ឋានត្រូវបានដាក់ជូនសម្រាប់ដំណើរការ និងវិភាគបន្ថែម។
ដំណើរការជីវព័ត៌មានវិទ្យាត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើវិធីសាស្ត្រដែលបានពិពណ៌នាពីមុន (Greenman et al., 2024)។ ឯកសារ FASTQ ដែលទទួលបានពីការធ្វើលំដាប់លំដោយត្រូវបានបែងចែកជាថតសម្រាប់គំរូនីមួយៗ។ មុនពេលវិភាគជីវព័ត៌មានវិទ្យា ទិន្នន័យត្រូវបានដំណើរការដោយប្រើបំពង់បង្ហូរទិន្នន័យដូចខាងក្រោម៖ ដំបូង ឯកសារ FASTQ នៃគំរូត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងឯកសារ FASTQ តែមួយ។ បន្ទាប់មក ការអានខ្លីជាង 1000 bp ត្រូវបានត្រងដោយប្រើ Filtlong v. 0.2.1 ដោយប៉ារ៉ាម៉ែត្រតែមួយគត់ដែលបានផ្លាស់ប្តូរគឺ –min_length 1000 (Wick, 2024)។ មុនពេលត្រងបន្ថែម គុណភាពអានត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយប្រើ NanoPlot v. 1.41.3 ជាមួយនឹងប៉ារ៉ាម៉ែត្រដូចខាងក្រោម៖ –fastq –plots dot –N50 -o
ចំពោះការចាត់ថ្នាក់ចំណាត់ថ្នាក់ ការអាន និង contigs ដែលបានផ្គុំត្រូវបានចាត់ថ្នាក់ដោយប្រើ Kraken2 v. 2.1.2 (Wood et al., 2019)។ បង្កើតរបាយការណ៍ និងឯកសារទិន្នផលសម្រាប់ការអាន និងការផ្គុំរៀងៗខ្លួន។ ប្រើជម្រើស –use-names ដើម្បីវិភាគការអាន និងការផ្គុំ។ ជម្រើស –gzip-compressed និង –paired ត្រូវបានបញ្ជាក់សម្រាប់ផ្នែកអាន។ ភាពសម្បូរបែបដែលទាក់ទងនៃ taxa នៅក្នុង metagenomes ត្រូវបានប៉ាន់ប្រមាណដោយប្រើ Bracken v. 2.8 (Lu et al., 2017)។ ដំបូងយើងបានបង្កើតមូលដ្ឋានទិន្នន័យ kmer ដែលមានមូលដ្ឋានចំនួន 1000 ដោយប្រើ bracken-build ជាមួយនឹងប៉ារ៉ាម៉ែត្រដូចខាងក្រោម៖ -d
ការកំណត់ចំណារពន្យល់ហ្សែន និងការប៉ាន់ប្រមាណភាពសម្បូរបែបដែលទាក់ទងត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើកំណែដែលបានកែប្រែនៃពិធីការដែលបានពិពណ៌នាដោយ Maranga et al. (Maranga et al., 2023)។ ដំបូងឡើយ contigs ដែលខ្លីជាង 500 bp ត្រូវបានយកចេញពីការផ្គុំទាំងអស់ដោយប្រើ SeqKit v. 2.5.1 (Shen et al., 2016)។ ការផ្គុំដែលបានជ្រើសរើសត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុង pan-metagenome។ ស៊ុមអានបើកចំហ (ORFs) ត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណដោយប្រើ Prodigal v. 1.0.1 (កំណែស្របគ្នានៃ Prodigal v. 2.6.3) ជាមួយនឹងប៉ារ៉ាម៉ែត្រដូចខាងក្រោម៖ -d
ហ្សែនត្រូវបានដាក់ជាក្រុមដំបូងយោងទៅតាមឧបករណ៍កំណត់អត្តសញ្ញាណអ័រថូឡូក (KO) របស់សព្វវចនាធិប្បាយក្យូតូនៃហ្សែន និងហ្សែន (KEGG) ដែលកំណត់ដោយ eggNOG ដើម្បីប្រៀបធៀបភាពសម្បូរបែបនៃផ្លូវហ្សែន។ ហ្សែនដែលគ្មានការគោះចេញ ឬហ្សែនដែលមានការគោះចេញច្រើនត្រូវបានដកចេញមុនពេលវិភាគ។ បន្ទាប់មកភាពសម្បូរបែបជាមធ្យមនៃ KO នីមួយៗក្នុងមួយគំរូត្រូវបានគណនា ហើយការវិភាគស្ថិតិត្រូវបានអនុវត្ត។ ហ្សែនមេតាបូលីស PPA ត្រូវបានកំណត់ថាជាហ្សែនណាមួយដែលត្រូវបានកំណត់ជួរដេក ko00640 នៅក្នុងជួរឈរ KEGG_Pathway ដែលបង្ហាញពីតួនាទីក្នុងការរំលាយអាហារ propionate យោងទៅតាម KEGG។ ហ្សែនដែលត្រូវបានកំណត់ថាជាប់ទាក់ទងនឹងការផលិត PPA ត្រូវបានរាយក្នុងតារាងបន្ថែមទី 1 (Reichardt et al., 2014; Yang et al., 2017)។ ការធ្វើតេស្ត permutation ត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីកំណត់អត្តសញ្ញាណហ្សែនមេតាបូលីស PPA និងផលិតកម្មដែលមានច្រើនគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងប្រភេទគំរូនីមួយៗ។ permutation មួយពាន់ត្រូវបានអនុវត្តសម្រាប់ហ្សែននីមួយៗដែលបានវិភាគ។ តម្លៃ p 0.05 ត្រូវបានប្រើជាចំណុចកាត់ផ្តាច់ដើម្បីកំណត់សារៈសំខាន់ខាងស្ថិតិ។ ចំណារពន្យល់មុខងារត្រូវបានកំណត់ទៅហ្សែននីមួយៗនៅក្នុងចង្កោមដោយផ្អែកលើចំណារពន្យល់នៃហ្សែនតំណាងនៅក្នុងចង្កោម។ ពពួកសត្វដែលជាប់ទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ PPA និង/ឬការផលិត PPA អាចត្រូវបានកំណត់ដោយការផ្គូផ្គងលេខសម្គាល់ contig នៅក្នុងឯកសារទិន្នផល Kraken2 ជាមួយនឹងលេខសម្គាល់ contig ដូចគ្នាដែលរក្សាទុកក្នុងអំឡុងពេលចំណារពន្យល់មុខងារដោយប្រើ eggNOG។ ការធ្វើតេស្តសារៈសំខាន់ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើតេស្ត Mann-Whitney U ដែលបានពិពណ៌នាពីមុន។ ការកែតម្រូវសម្រាប់ការធ្វើតេស្តច្រើនត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើនីតិវិធី Benjamini-Hochberg។ តម្លៃ p ≤ 0.05 ត្រូវបានប្រើជាចំណុចកាត់ផ្តាច់ដើម្បីកំណត់សារៈសំខាន់ស្ថិតិ។
ភាពចម្រុះនៃមីក្រូជីវសាស្ត្រពោះវៀនរបស់សត្វកណ្ដុរត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើសន្ទស្សន៍ភាពចម្រុះ Simpson។ មិនមានភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់ណាមួយត្រូវបានគេសង្កេតឃើញរវាងគំរូត្រួតពិនិត្យ និងគំរូ PPA ទាក់ទងនឹងភាពចម្រុះនៃពូជ និងប្រភេទសត្វ (តម្លៃ p សម្រាប់ពូជ៖ 0.18 តម្លៃ p សម្រាប់ប្រភេទសត្វ៖ 0.16) (រូបភាពទី 1)។ បន្ទាប់មកសមាសភាពមីក្រូជីវសាស្ត្រត្រូវបានប្រៀបធៀបដោយប្រើការវិភាគសមាសធាតុចម្បង (PCA)។ រូបភាពទី 2 បង្ហាញពីការដាក់ជាក្រុមនៃគំរូតាម phyla របស់វា ដែលបង្ហាញថាមានភាពខុសគ្នានៅក្នុងសមាសភាពប្រភេទសត្វនៃមីក្រូជីវសាស្ត្ររវាងគំរូ PPA និងគំរូត្រួតពិនិត្យ។ ការដាក់ជាក្រុមនេះមិនសូវច្បាស់នៅកម្រិតពូជទេ ដែលបង្ហាញថា PPA ប៉ះពាល់ដល់បាក់តេរីមួយចំនួន (រូបភាពបន្ថែមទី 1)។
រូបភាពទី 1. ភាពចម្រុះអាល់ហ្វានៃពូជ និងសមាសភាពប្រភេទសត្វនៃមីក្រូជីវសាស្រ្តពោះវៀនកណ្ដុរ។ គំនូសតាងប្រអប់បង្ហាញសន្ទស្សន៍ភាពចម្រុះ Simpson នៃពូជ (A) និងប្រភេទសត្វ (B) នៅក្នុង PPA និងគំរូត្រួតពិនិត្យ។ សារៈសំខាន់ត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើតេស្ត Mann-Whitney U ហើយការកែតម្រូវច្រើនដងត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើនីតិវិធី Benjamini-Hochberg។ ns តម្លៃ p មិនសំខាន់ទេ (p>0.05)។
រូបភាពទី 2. លទ្ធផលនៃការវិភាគសមាសធាតុចម្បងនៃសមាសធាតុអតិសុខុមជីវៈពោះវៀនកណ្ដុរនៅកម្រិតប្រភេទសត្វ។ គ្រោងការវិភាគសមាសធាតុចម្បងបង្ហាញពីការចែកចាយគំរូនៅទូទាំងសមាសធាតុចម្បងពីរដំបូងរបស់វា។ ពណ៌បង្ហាញពីប្រភេទគំរូ៖ កណ្ដុរដែលប៉ះពាល់នឹង PPA មានពណ៌ស្វាយ និងកណ្ដុរត្រួតពិនិត្យមានពណ៌លឿង។ សមាសធាតុចម្បង 1 និង 2 ត្រូវបានគូសនៅលើអ័ក្ស x និងអ័ក្ស y រៀងៗខ្លួន ហើយត្រូវបានបង្ហាញជាសមាមាត្រភាពខុសគ្នាដែលបានពន្យល់របស់វា។
ដោយប្រើប្រាស់ទិន្នន័យរាប់ដែលបានបំលែង RLE ការថយចុះគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃសមាមាត្រ Bacteroidetes/Bacilli មធ្យមត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅក្នុងកណ្ដុរត្រួតពិនិត្យ និងកណ្ដុរ PPA (ត្រួតពិនិត្យ៖ 9.66, PPA: 3.02; p-value = 0.0011)។ ភាពខុសគ្នានេះគឺដោយសារតែភាពសម្បូរបែបនៃ Bacteroidetes ខ្ពស់នៅក្នុងកណ្ដុរ PPA បើប្រៀបធៀបទៅនឹងកណ្ដុរត្រួតពិនិត្យ ទោះបីជាភាពខុសគ្នាមិនសំខាន់ក៏ដោយ (CLR មធ្យមភាគត្រួតពិនិត្យ៖ 5.51, CLR មធ្យមភាគ PPA៖ 6.62; p-value = 0.054) ខណៈពេលដែលភាពសម្បូរបែបនៃ Bacteroidetes គឺស្រដៀងគ្នា (CLR មធ្យមភាគត្រួតពិនិត្យ៖ 7.76, CLR មធ្យមភាគ PPA៖ 7.60; p-value = 0.18)។
ការវិភាគអំពីភាពសម្បូរបែបនៃសមាជិកចំណាត់ថ្នាក់នៃមីក្រូជីវសាស្ត្រពោះវៀនបានបង្ហាញថា 1 ហ្វាឡាំ និង 77 ប្រភេទសត្វមានភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់រវាងគំរូ PPA និងគំរូត្រួតពិនិត្យ (តារាងបន្ថែមទី 2)។ ភាពសម្បូរបែបនៃ 59 ប្រភេទសត្វនៅក្នុងគំរូ PPA គឺខ្ពស់ជាងគំរូត្រួតពិនិត្យយ៉ាងខ្លាំង ខណៈពេលដែលភាពសម្បូរបែបនៃ 16 ប្រភេទសត្វនៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យគឺខ្ពស់ជាងគំរូ PPA (រូបភាពទី 3)។
រូបភាពទី 3. ភាពសម្បូរបែបឌីផេរ៉ង់ស្យែលនៃពពួកសត្វនៅក្នុងមីក្រូជីវសាស្ត្រពោះវៀនរបស់ PPA និងកណ្តុរត្រួតពិនិត្យ។ គំនូសតាងភ្នំភ្លើងបង្ហាញពីភាពខុសគ្នានៃភាពសម្បូរបែបនៃពូជ (A) ឬប្រភេទសត្វ (B) រវាងគំរូ PPA និងគំរូត្រួតពិនិត្យ។ ចំណុចពណ៌ប្រផេះបង្ហាញថាមិនមានភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែបនៃពពួកសត្វទេ។ ចំណុចពណ៌បង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែប (តម្លៃ p ≤ 0.05)។ ពពួកសត្វកំពូលទាំង 20 ដែលមានភាពខុសគ្នាច្រើនបំផុតនៃភាពសម្បូរបែបរវាងប្រភេទគំរូត្រូវបានបង្ហាញជាពណ៌ក្រហម និងពណ៌ខៀវខ្ចី (គំរូត្រួតពិនិត្យ និង PPA) រៀងៗខ្លួន។ ចំណុចពណ៌លឿង និងពណ៌ស្វាយមានយ៉ាងហោចណាស់ 2.7 ដងច្រើនជាងនៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យ ឬ PPA ជាងនៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យ។ ចំណុចពណ៌ខ្មៅតំណាងឱ្យពពួកសត្វដែលមានភាពសម្បូរបែបខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់ ជាមួយនឹងភាពខុសគ្នានៃ CLR មធ្យមរវាង -1 និង 1។ តម្លៃ P ត្រូវបានគណនាដោយប្រើតេស្ត Mann-Whitney U ហើយត្រូវបានកែតម្រូវសម្រាប់ការធ្វើតេស្តច្រើនដោយប្រើនីតិវិធី Benjamini-Hochberg។ ភាពខុសគ្នានៃ CLR មធ្យមដិតបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែប។
បន្ទាប់ពីវិភាគសមាសភាពអតិសុខុមប្រាណក្នុងពោះវៀនរួច យើងបានធ្វើកំណត់ចំណាំមុខងារនៃអតិសុខុមជីវៈ។ បន្ទាប់ពីត្រងចេញនូវហ្សែនដែលមានគុណភាពទាប ហ្សែនតែមួយគត់សរុបចំនួន 378,355 ត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណនៅទូទាំងគំរូទាំងអស់។ ភាពសម្បូរបែបដែលបានផ្លាស់ប្តូរនៃហ្សែនទាំងនេះត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការវិភាគសមាសធាតុចម្បង (PCA) ហើយលទ្ធផលបានបង្ហាញពីកម្រិតខ្ពស់នៃការដាក់ជាក្រុមនៃប្រភេទគំរូដោយផ្អែកលើទម្រង់មុខងាររបស់វា (រូបភាពទី 4)។
រូបភាពទី 4. លទ្ធផល PCA ដោយប្រើទម្រង់មុខងារនៃមីក្រូជីវពោះវៀនកណ្ដុរ។ គ្រោង PCA បង្ហាញពីការចែកចាយគំរូនៅទូទាំងសមាសធាតុសំខាន់ពីរដំបូងរបស់វា។ ពណ៌បង្ហាញពីប្រភេទគំរូ៖ កណ្ដុរដែលប៉ះពាល់នឹង PPA មានពណ៌ស្វាយ និងកណ្ដុរត្រួតពិនិត្យមានពណ៌លឿង។ សមាសធាតុសំខាន់ៗ 1 និង 2 ត្រូវបានគ្រោងលើអ័ក្ស x និងអ័ក្ស y រៀងៗខ្លួន ហើយត្រូវបានបង្ហាញជាសមាមាត្រភាពខុសគ្នាដែលបានពន្យល់របស់វា។
បន្ទាប់មក យើងបានពិនិត្យមើលភាពសម្បូរបែបនៃ KEGG knockouts នៅក្នុងប្រភេទគំរូផ្សេងៗគ្នា។ សរុបមក មាន knockouts តែមួយគត់ចំនួន 3648 ត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណ ដែលក្នុងនោះ 196 មានច្រើនជាងនៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យ និង 106 មានច្រើនជាងនៅក្នុងគំរូ PPA (រូបភាពទី 5)។ ហ្សែនសរុបចំនួន 145 ត្រូវបានរកឃើញនៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យ និងហ្សែនចំនួន 61 នៅក្នុងគំរូ PPA ដែលមានបរិមាណខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់។ ផ្លូវដែលទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ lipid និង aminosugar មានភាពសម្បូរបែបគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងគំរូ PPA (តារាងបន្ថែមទី 3)។ ផ្លូវដែលទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារអាសូត និងប្រព័ន្ធបញ្ជូនស្ពាន់ធ័រមានភាពសម្បូរបែបគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យ (តារាងបន្ថែមទី 3)។ ភាពសម្បូរបែបនៃហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ aminosugar/nucleotide (ko:K21279) និងការរំលាយអាហារ inositol phosphate (ko:K07291) គឺខ្ពស់ជាងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងគំរូ PPA (រូបភាពទី 5)។ គំរូត្រួតពិនិត្យមានហ្សែនច្រើនជាងគួរឱ្យកត់សម្គាល់ទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ benzoate (ko:K22270) ការរំលាយអាហារអាសូត (ko:K00368) និង glycolysis/gluconeogenesis (ko:K00131) (រូបភាពទី 5)។
រូបភាពទី 5. ភាពសម្បូរបែបឌីផេរ៉ង់ស្យែលនៃ KOs នៅក្នុងមីក្រូជីវពោះវៀនរបស់កណ្តុរ PPA និងកណ្តុរត្រួតពិនិត្យ។ គ្រោងភ្នំភ្លើងពណ៌នាអំពីភាពខុសគ្នានៃភាពសម្បូរបែបនៃក្រុមមុខងារ (KOs)។ ចំណុចពណ៌ប្រផេះបង្ហាញពី KOs ដែលភាពសម្បូរបែបមិនខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់រវាងប្រភេទគំរូ (p-value > 0.05)។ ចំណុចពណ៌បង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែប (p-value ≤ 0.05)។ KOs ចំនួន 20 ដែលមានភាពខុសគ្នាច្រើនបំផុតនៃភាពសម្បូរបែបរវាងប្រភេទគំរូត្រូវបានបង្ហាញជាពណ៌ក្រហម និងពណ៌ខៀវខ្ចី ដែលត្រូវគ្នានឹងគំរូត្រួតពិនិត្យ និង PPA រៀងៗខ្លួន។ ចំណុចពណ៌លឿង និងពណ៌ស្វាយបង្ហាញពី KOs ដែលមានយ៉ាងហោចណាស់ 2.7 ដងច្រើនជាងនៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យ និង PPA រៀងៗខ្លួន។ ចំណុចពណ៌ខ្មៅបង្ហាញពី KOs ដែលមានភាពសម្បូរបែបខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់ ជាមួយនឹងភាពខុសគ្នានៃ CLR មធ្យមរវាង -1 និង 1។ តម្លៃ P ត្រូវបានគណនាដោយប្រើតេស្ត Mann-Whitney U ហើយត្រូវបានកែតម្រូវសម្រាប់ការប្រៀបធៀបច្រើនដោយប្រើនីតិវិធី Benjamini-Hochberg។ NaN បង្ហាញថា KO មិនមែនជារបស់ផ្លូវនៅក្នុង KEGG ទេ។ តម្លៃភាពខុសគ្នានៃ CLR មធ្យមដិតបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែប។ សម្រាប់ព័ត៌មានលម្អិតអំពីផ្លូវដែល KOs ដែលបានចុះបញ្ជីជាកម្មសិទ្ធិ សូមមើលតារាងបន្ថែមទី 3។
ក្នុងចំណោមហ្សែនដែលបានកំណត់ចំណាំ ហ្សែនចំនួន 1601 មានភាពសម្បូរបែបខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់រវាងប្រភេទគំរូ (p ≤ 0.05) ដោយហ្សែននីមួយៗមានភាពសម្បូរបែបយ៉ាងហោចណាស់ 2.7 ដង។ ក្នុងចំណោមហ្សែនទាំងនេះ ហ្សែនចំនួន 4 មានច្រើននៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យ និងហ្សែនចំនួន 1597 មានច្រើននៅក្នុងគំរូ PPA។ ដោយសារតែ PPA មានលក្ខណៈសម្បត្តិប្រឆាំងនឹងមេរោគ យើងបានពិនិត្យមើលភាពសម្បូរបែបនៃការរំលាយអាហារ PPA និងហ្សែនផលិតកម្មរវាងប្រភេទគំរូ។ ក្នុងចំណោមហ្សែនទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ PPA ចំនួន 1332 ហ្សែនចំនួន 27 មានច្រើននៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យ និងហ្សែនចំនួន 12 មានច្រើននៅក្នុងគំរូ PPA។ ក្នុងចំណោមហ្សែនទាក់ទងនឹងការផលិត PPA ចំនួន 223 ហ្សែនចំនួន 1 មានច្រើននៅក្នុងគំរូ PPA។ រូបភាពទី 6A បង្ហាញបន្ថែមទៀតអំពីភាពសម្បូរបែបខ្ពស់នៃហ្សែនដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការរំលាយអាហារ PPA ជាមួយនឹងភាពសម្បូរបែបខ្ពស់នៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យ និងទំហំឥទ្ធិពលធំ ខណៈពេលដែលរូបភាពទី 6B បន្លិចហ្សែននីមួយៗដែលមានភាពសម្បូរបែបខ្ពស់គួរឱ្យកត់សម្គាល់ដែលសង្កេតឃើញនៅក្នុងគំរូ PPA។
រូបភាពទី 6. ភាពសម្បូរបែបឌីផេរ៉ង់ស្យែលនៃហ្សែនដែលទាក់ទងនឹង PPA នៅក្នុងមីក្រូជីវពោះវៀនកណ្ដុរ។ គ្រោងភ្នំភ្លើងពណ៌នាអំពីភាពខុសគ្នានៃភាពសម្បូរបែបនៃហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ PPA (A) និងការផលិត PPA (B)។ ចំណុចពណ៌ប្រផេះបង្ហាញពីហ្សែនដែលភាពសម្បូរបែបមិនខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់រវាងប្រភេទគំរូ (តម្លៃ p > 0.05)។ ចំណុចពណ៌បង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែប (តម្លៃ p ≤ 0.05)។ ហ្សែនចំនួន 20 ដែលមានភាពខុសគ្នាច្រើនបំផុតនៃភាពសម្បូរបែបត្រូវបានបង្ហាញជាពណ៌ក្រហម និងខៀវខ្ចី (គំរូត្រួតពិនិត្យ និង PPA) រៀងៗខ្លួន។ ភាពសម្បូរបែបនៃចំណុចពណ៌លឿង និងពណ៌ស្វាយគឺច្រើនជាងយ៉ាងហោចណាស់ 2.7 ដងនៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យ និង PPA ជាងគំរូត្រួតពិនិត្យ។ ចំណុចពណ៌ខ្មៅតំណាងឱ្យហ្សែនដែលមានភាពសម្បូរបែបខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់ ជាមួយនឹងភាពខុសគ្នា CLR មធ្យមរវាង -1 និង 1។ តម្លៃ P ត្រូវបានគណនាដោយប្រើតេស្ត Mann-Whitney U និងកែតម្រូវសម្រាប់ការប្រៀបធៀបច្រើនដោយប្រើនីតិវិធី Benjamini-Hochberg។ ហ្សែនត្រូវគ្នាទៅនឹងហ្សែនតំណាងនៅក្នុងកាតាឡុកហ្សែនដែលមិនស្ទួន។ ឈ្មោះហ្សែនមាននិមិត្តសញ្ញា KEGG ដែលបង្ហាញពីហ្សែន KO។ ភាពខុសគ្នា CLR មធ្យមដិតបង្ហាញពីភាពសម្បូរបែបខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់។ សញ្ញា (-) បង្ហាញថាមិនមាននិមិត្តសញ្ញាសម្រាប់ហ្សែននៅក្នុងមូលដ្ឋានទិន្នន័យ KEGG ទេ។
ពពួកសត្វដែលមានហ្សែនទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ និង/ឬការផលិត PPA ត្រូវបានកំណត់អត្តសញ្ញាណដោយការផ្គូផ្គងអត្តសញ្ញាណវណ្ណយុត្តិនៃពពួកសត្វជាប់គ្នាជាមួយនឹងលេខសម្គាល់ពពួកសត្វជាប់គ្នានៃហ្សែន។ នៅកម្រិតពពួកសត្វ ពពួកសត្វចំនួន 130 ត្រូវបានគេរកឃើញថាមានហ្សែនទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ PPA និងពពួកសត្វចំនួន 61 ត្រូវបានគេរកឃើញថាមានហ្សែនទាក់ទងនឹងការផលិត PPA (តារាងបន្ថែមទី 4)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ គ្មានពពួកសត្វណាមួយបានបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែបនោះទេ (p > 0.05)។
នៅកម្រិតប្រភេទសត្វ ប្រភេទបាក់តេរីចំនួន 144 ត្រូវបានគេរកឃើញថាមានហ្សែនដែលជាប់ទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ PPA និងប្រភេទបាក់តេរីចំនួន 68 ត្រូវបានគេរកឃើញថាមានហ្សែនដែលជាប់ទាក់ទងនឹងការផលិត PPA (តារាងបន្ថែមទី 5)។ ក្នុងចំណោមសារធាតុរំលាយ PPA បាក់តេរីចំនួនប្រាំបីបានបង្ហាញពីការកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែបរវាងប្រភេទគំរូ ហើយទាំងអស់បានបង្ហាញពីការផ្លាស់ប្តូរគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងប្រសិទ្ធភាព (តារាងបន្ថែមទី 6)។ សារធាតុរំលាយ PPA ទាំងអស់ដែលបានកំណត់អត្តសញ្ញាណដែលមានភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែបគឺមានច្រើនជាងនៅក្នុងគំរូ PPA។ ចំណាត់ថ្នាក់កម្រិតប្រភេទសត្វបានបង្ហាញពីអ្នកតំណាងនៃហ្សែនដែលមិនមានភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់រវាងប្រភេទគំរូ រួមទាំងប្រភេទ Bacteroides និង Ruminococcus ជាច្រើន ក៏ដូចជា Duncania dubois, Myxobacterium enterica, Monococcus pectinolyticus និង Alcaligenes polymorpha។ ក្នុងចំណោមបាក់តេរីដែលផលិត PPA បាក់តេរីចំនួនបួនបានបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែបរវាងប្រភេទគំរូ។ ប្រភេទសត្វដែលមានភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែបរួមមាន Bacteroides novorossi, Duncania dubois, Myxobacterium enteritidis និង Ruminococcus bovis។
នៅក្នុងការសិក្សានេះ យើងបានពិនិត្យមើលផលប៉ះពាល់នៃការប៉ះពាល់នឹង PPA ទៅលើមីក្រូជីវសាស្រ្តពោះវៀនរបស់សត្វកណ្ដុរ។ PPA អាចបង្កឱ្យមានប្រតិកម្មខុសៗគ្នានៅក្នុងបាក់តេរី ពីព្រោះវាត្រូវបានផលិតដោយប្រភេទសត្វមួយចំនួន ត្រូវបានប្រើជាប្រភពអាហារដោយប្រភេទសត្វដទៃទៀត ឬមានប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងមេរោគ។ ដូច្នេះ ការបន្ថែមរបស់វាទៅក្នុងបរិស្ថានពោះវៀនតាមរយៈការបន្ថែមអាហារអាចមានផលប៉ះពាល់ខុសៗគ្នាអាស្រ័យលើការអត់ធ្មត់ ភាពងាយរងគ្រោះ និងសមត្ថភាពក្នុងការប្រើប្រាស់វាជាប្រភពសារធាតុចិញ្ចឹម។ ប្រភេទបាក់តេរីដែលងាយរងគ្រោះអាចត្រូវបានលុបបំបាត់ និងជំនួសដោយប្រភេទដែលមានភាពធន់នឹង PPA ឬអាចប្រើប្រាស់វាជាប្រភពអាហារ ដែលនាំឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរសមាសភាពនៃមីក្រូជីវសាស្រ្តពោះវៀន។ លទ្ធផលរបស់យើងបានបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងសមាសភាពមីក្រូជីវសាស្រ្តពោះវៀន។ លទ្ធផលរបស់យើងបានបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងសមាសភាពមីក្រូជីវសាស្រ្តពោះវៀន។ លទ្ធផលរបស់យើងបានបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងសមាសភាពមីក្រូជីវសាស្រ្ត ប៉ុន្តែមិនមានឥទ្ធិពលលើភាពចម្រុះនៃមីក្រូជីវសាស្រ្តទាំងមូលនោះទេ។ ផលប៉ះពាល់ធំបំផុតត្រូវបានគេសង្កេតឃើញនៅកម្រិតប្រភេទសត្វ ដោយមានប្រភេទសត្វជាង 70 ប្រភេទដែលមានភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់រវាងគំរូ PPA និងគំរូត្រួតពិនិត្យ (តារាងបន្ថែមទី 2)។ ការវាយតម្លៃបន្ថែមទៀតអំពីសមាសភាពនៃគំរូដែលប៉ះពាល់នឹង PPA បានបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាកាន់តែច្រើននៃប្រភេទមីក្រូជីវសាស្រ្តបើប្រៀបធៀបទៅនឹងគំរូដែលមិនទាន់ប៉ះពាល់ ដែលបង្ហាញថា PPA អាចបង្កើនលក្ខណៈលូតលាស់របស់បាក់តេរី និងកំណត់ចំនួនប្រជាជនបាក់តេរីដែលអាចរស់រានមានជីវិតនៅក្នុងបរិស្ថានដែលសម្បូរទៅដោយ PPA។ ដូច្នេះ PPA អាចបង្កឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរជាជម្រើសជាជាងបណ្តាលឱ្យមានការរំខានយ៉ាងទូលំទូលាយនៃភាពចម្រុះនៃមីក្រូជីវសាស្រ្តពោះវៀន។
សារធាតុរក្សាទុកអាហារដូចជា PPA ពីមុនត្រូវបានបង្ហាញថាអាចផ្លាស់ប្តូរភាពសម្បូរបែបនៃសមាសធាតុមីក្រូជីវសាស្ត្រពោះវៀនដោយមិនប៉ះពាល់ដល់ភាពចម្រុះទាំងមូល (Nagpal et al., 2021)។ នៅទីនេះ យើងបានសង្កេតឃើញភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់បំផុតរវាងប្រភេទ Bacteroidetes នៅក្នុងប្រភេទ Bacteroidetes (ពីមុនត្រូវបានគេស្គាល់ថា Bacteroidetes) ដែលសម្បូរទៅដោយសារធាតុចិញ្ចឹមយ៉ាងច្រើននៅក្នុងសត្វកណ្តុរដែលប៉ះពាល់នឹង PPA។ ការកើនឡើងនៃភាពសម្បូរបែបនៃប្រភេទ Bacteroides ត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការរិចរិលទឹករំអិលកើនឡើង ដែលអាចបង្កើនហានិភ័យនៃការឆ្លងមេរោគ និងជំរុញការរលាក (Cornick et al., 2015; Desai et al., 2016; Penzol et al., 2019)។ ការសិក្សាមួយបានរកឃើញថា សត្វកណ្តុរឈ្មោលទើបនឹងកើតដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ Bacteroides fragilis បានបង្ហាញពីអាកប្បកិរិយាសង្គមដែលរំលឹកដល់ជំងឺវិសាលគមអូទីសឹម (ASD) (Carmel et al., 2023) ហើយការសិក្សាផ្សេងទៀតបានបង្ហាញថា ប្រភេទ Bacteroides អាចផ្លាស់ប្តូរសកម្មភាពភាពស៊ាំ និងនាំឱ្យមានជំងឺរលាកសាច់ដុំបេះដូងដោយស្វ័យប្រវត្តិ (Gil-Cruz et al., 2019)។ ប្រភេទសត្វដែលជាកម្មសិទ្ធិរបស់ពូជ Ruminococcus, Prevotella និង Parabacteroides ក៏បានកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់ផងដែរនៅក្នុងសត្វកណ្តុរដែលប៉ះពាល់នឹង PPA (Coretti et al., 2018)។ ប្រភេទ Ruminococcus មួយចំនួនត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងជំងឺដូចជាជំងឺ Crohn តាមរយៈការផលិត cytokines បង្កការរលាក (Henke et al., 2019) ខណៈពេលដែលប្រភេទ Prevotella ដូចជា Prevotella humani ត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងជំងឺមេតាបូលីសដូចជាជំងឺលើសឈាម និងភាពប្រែប្រួលអាំងស៊ុយលីន (Pedersen et al., 2016; Li et al., 2017)។ ជាចុងក្រោយ យើងបានរកឃើញថាសមាមាត្រនៃ Bacteroidetes (ពីមុនត្រូវបានគេស្គាល់ថាជា Firmicutes) ទៅនឹង Bacteroidetes គឺទាបជាងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងសត្វកណ្តុរដែលប៉ះពាល់នឹង PPA ជាងសត្វកណ្តុរត្រួតពិនិត្យដោយសារតែមានបរិមាណសរុបខ្ពស់នៃប្រភេទ Bacteroidetes។ សមាមាត្រនេះត្រូវបានបង្ហាញពីមុនថាជាសូចនាករសំខាន់មួយនៃ homeostasis ពោះវៀន ហើយការរំខាននៅក្នុងសមាមាត្រនេះត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងស្ថានភាពជំងឺផ្សេងៗ (Turpin et al., 2016; Takezawa et al., 2021; An et al., 2023) រួមទាំងជំងឺរលាកពោះវៀន (Stojanov et al., 2020)។ ជារួម ប្រភេទសត្វនៃប្រភេទ Bacteroidetes ហាក់ដូចជារងផលប៉ះពាល់ខ្លាំងបំផុតដោយ PPA កម្រិតខ្ពស់នៃរបបអាហារ។ នេះអាចបណ្តាលមកពីការអត់ធ្មត់ខ្ពស់ចំពោះ PPA ឬសមត្ថភាពក្នុងការប្រើប្រាស់ PPA ជាប្រភពថាមពល ដែលត្រូវបានបង្ហាញថាជាការពិតសម្រាប់យ៉ាងហោចណាស់ប្រភេទសត្វមួយគឺ Hoylesella enocea (Hitch et al., 2022)។ ម៉្យាងវិញទៀត ការប៉ះពាល់នឹង PPA របស់ម្តាយអាចជួយបង្កើនការអភិវឌ្ឍរបស់ទារកដោយធ្វើឱ្យពោះវៀនរបស់កូនចៅកណ្ដុរងាយនឹងទទួលរងនូវអាណានិគម Bacteroidetes ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការរចនាការសិក្សារបស់យើងមិនបានអនុញ្ញាតឱ្យមានការវាយតម្លៃបែបនេះទេ។
ការវាយតម្លៃមាតិកាមេតាហ្សែនបានបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងភាពសម្បូរបែបនៃហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ និងការផលិត PPA ដោយកណ្តុរដែលប៉ះពាល់នឹង PPA បង្ហាញពីភាពសម្បូរបែបនៃហ្សែនដែលទទួលខុសត្រូវចំពោះការផលិត PPA ខណៈពេលដែលកណ្តុរដែលមិនប៉ះពាល់នឹង PPA បង្ហាញពីភាពសម្បូរបែបនៃហ្សែនដែលទទួលខុសត្រូវចំពោះការរំលាយអាហារ PAA (រូបភាពទី 6)។ លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញថាឥទ្ធិពលនៃ PPA លើសមាសភាពអតិសុខុមប្រាណអាចមិនមែនដោយសារតែការប្រើប្រាស់របស់វាតែមួយមុខនោះទេ បើមិនដូច្នោះទេភាពសម្បូរបែបនៃហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ PPA គួរតែបង្ហាញពីភាពសម្បូរបែបខ្ពស់នៅក្នុងមីក្រូជីវពោះវៀនរបស់កណ្តុរដែលប៉ះពាល់នឹង PPA។ ការពន្យល់មួយគឺថា PPA សម្របសម្រួលភាពសម្បូរបែបនៃបាក់តេរីជាចម្បងតាមរយៈប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងមេរោគរបស់វាជាជាងតាមរយៈការប្រើប្រាស់របស់វាដោយបាក់តេរីជាសារធាតុចិញ្ចឹម។ ការសិក្សាពីមុនបានបង្ហាញថា PPA រារាំងការលូតលាស់របស់ Salmonella Typhimurium តាមរបៀបអាស្រ័យលើកម្រិតថ្នាំ (Jacobson et al., 2018)។ ការប៉ះពាល់នឹងកំហាប់ខ្ពស់នៃ PPA អាចជ្រើសរើសបាក់តេរីដែលធន់នឹងលក្ខណៈសម្បត្តិប្រឆាំងមេរោគរបស់វា ហើយប្រហែលជាមិនចាំបាច់អាចរំលាយ ឬផលិតវាបាននោះទេ។ ឧទាហរណ៍ ប្រភេទ Parabacteroides ជាច្រើនបានបង្ហាញពីភាពសម្បូរបែបខ្ពស់ជាងនៅក្នុងគំរូ PPA ប៉ុន្តែមិនមានហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ ឬការផលិត PPA ត្រូវបានរកឃើញទេ (តារាងបន្ថែម 2, 4, និង 5)។ លើសពីនេះ ការផលិត PPA ជាផលិតផលរងនៃការ fermentation ត្រូវបានចែកចាយយ៉ាងទូលំទូលាយក្នុងចំណោមបាក់តេរីផ្សេងៗ (Gonzalez-Garcia et al., 2017)។ ភាពចម្រុះបាក់តេរីខ្ពស់អាចជាមូលហេតុនៃភាពសម្បូរបែបខ្ពស់នៃហ្សែនដែលទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ PPA នៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យ (Averina et al., 2020)។ លើសពីនេះ មានតែហ្សែន 27 (2.14%) នៃ 1332 ប៉ុណ្ណោះដែលត្រូវបានគេព្យាករណ៍ថាជាហ្សែនដែលជាប់ទាក់ទងទាំងស្រុងជាមួយនឹងការរំលាយអាហារ PPA។ ហ្សែនជាច្រើនដែលជាប់ទាក់ទងជាមួយនឹងការរំលាយអាហារ PPA ក៏ពាក់ព័ន្ធនឹងផ្លូវរំលាយអាហារផ្សេងទៀតផងដែរ។ នេះបង្ហាញបន្ថែមទៀតថា ភាពសម្បូរបែបនៃហ្សែនដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការរំលាយអាហារ PPA គឺខ្ពស់ជាងនៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យ។ ហ្សែនទាំងនេះអាចដំណើរការក្នុងផ្លូវដែលមិនបណ្តាលឱ្យមានការប្រើប្រាស់ ឬការបង្កើត PPA ជាផលិតផលរង។ ក្នុងករណីនេះ មានតែហ្សែនមួយប៉ុណ្ណោះដែលជាប់ទាក់ទងជាមួយនឹងការបង្កើត PPA បានបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃភាពសម្បូរបែបរវាងប្រភេទគំរូ។ ផ្ទុយពីហ្សែនដែលជាប់ទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ PPA ហ្សែនសម្គាល់សម្រាប់ការផលិត PPA ត្រូវបានជ្រើសរើសព្រោះវាពាក់ព័ន្ធដោយផ្ទាល់នៅក្នុងផ្លូវបាក់តេរីសម្រាប់ការផលិត PPA។ ចំពោះសត្វកណ្ដុរដែលប៉ះពាល់នឹង PPA ប្រភេទសត្វទាំងអស់ត្រូវបានគេរកឃើញថាមានភាពសម្បូរបែប និងសមត្ថភាពក្នុងការផលិត PPA កើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់។ នេះគាំទ្រដល់ការព្យាករណ៍ថា PPA នឹងជ្រើសរើសអ្នកផលិត PPA ហើយដូច្នេះព្យាករណ៍ថាសមត្ថភាពផលិត PPA នឹងកើនឡើង។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ភាពសម្បូរបែបនៃហ្សែនមិនចាំបាច់មានទំនាក់ទំនងជាមួយនឹងការបញ្ចេញហ្សែននោះទេ។ ដូច្នេះ ទោះបីជាភាពសម្បូរបែបនៃហ្សែនដែលជាប់ទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារ PPA ខ្ពស់ជាងនៅក្នុងគំរូត្រួតពិនិត្យក៏ដោយ អត្រានៃការបញ្ចេញមតិអាចខុសគ្នា (Shi et al., 2014)។ ដើម្បីបញ្ជាក់ពីទំនាក់ទំនងរវាងភាពរីករាលដាលនៃហ្សែនផលិត PPA និងការផលិត PPA ការសិក្សាអំពីការបញ្ចេញមតិនៃហ្សែនដែលពាក់ព័ន្ធនឹងការផលិត PPA គឺត្រូវការជាចាំបាច់។
ការកត់ចំណាំមុខងារនៃ PPA និងមេតាហ្សែនត្រួតពិនិត្យបានបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាមួយចំនួន។ ការវិភាគ PCA នៃមាតិកាហ្សែនបានបង្ហាញពីចង្កោមដាច់ដោយឡែកពីគ្នារវាងគំរូ PPA និងគំរូត្រួតពិនិត្យ (រូបភាពទី 5)។ ការដាក់ចង្កោមក្នុងគំរូបានបង្ហាញថាមាតិកាហ្សែនត្រួតពិនិត្យមានភាពចម្រុះជាង ខណៈដែលគំរូ PPA បានដាក់ចង្កោមជាមួយគ្នា។ ការដាក់ចង្កោមតាមមាតិកាហ្សែនគឺអាចប្រៀបធៀបទៅនឹងការដាក់ចង្កោមតាមសមាសភាពប្រភេទសត្វ។ ដូច្នេះ ភាពខុសគ្នានៃភាពសម្បូរបែបនៃផ្លូវគឺស្របនឹងការផ្លាស់ប្តូរនៃភាពសម្បូរបែបនៃប្រភេទសត្វ និងពូជជាក់លាក់នៅក្នុងពួកវា។ នៅក្នុងគំរូ PPA ផ្លូវពីរដែលមានភាពសម្បូរបែបខ្ពស់ជាងគួរឲ្យកត់សម្គាល់គឺទាក់ទងនឹងការរំលាយអាហារស្ករអាមីណូស្ករ/នុយក្លេអូទីត (ko:K21279) និងផ្លូវរំលាយអាហារខ្លាញ់ច្រើន (ko:K00647, ko:K03801; តារាងបន្ថែម 3)។ ហ្សែនដែលជាប់ទាក់ទងនឹង ko:K21279 ត្រូវបានគេដឹងថាជាប់ទាក់ទងនឹងពពួក Bacteroides ដែលជាពពួកមួយក្នុងចំណោមពពួកសត្វដែលមានចំនួនខ្ពស់ជាងគួរឲ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងគំរូ PPA។ អង់ស៊ីមនេះអាចគេចពីការឆ្លើយតបភាពស៊ាំដោយការបញ្ចេញសារធាតុប៉ូលីសាខ័រកាបស៊ុល (Wang et al., 2008)។ នេះអាចជាមូលហេតុនៃការកើនឡើងនៃ Bacteroidetes ដែលត្រូវបានសង្កេតឃើញនៅក្នុងសត្វកណ្ដុរដែលប៉ះពាល់នឹង PPA។ នេះបំពេញបន្ថែមដល់ការកើនឡើងនៃការសំយោគអាស៊ីតខ្លាញ់ដែលសង្កេតឃើញនៅក្នុងមីក្រូជីវម PPA។ បាក់តេរីប្រើប្រាស់ផ្លូវ FASIIko:K00647 (fabB) ដើម្បីផលិតអាស៊ីតខ្លាញ់ ដែលអាចមានឥទ្ធិពលលើផ្លូវមេតាបូលីសរបស់ម៉ាស៊ីន (Yao និង Rock, 2015; Johnson et al., 2020) ហើយការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងការរំលាយអាហារ lipid អាចដើរតួនាទីក្នុងការវិវឌ្ឍន៍សរសៃប្រសាទ (Yu et al., 2020)។ ផ្លូវមួយទៀតដែលបង្ហាញពីការកើនឡើងនៃភាពសម្បូរបែបនៅក្នុងគំរូ PPA គឺជីវសំយោគអរម៉ូនស្តេរ៉ូអ៊ីត (ko:K12343)។ មានភស្តុតាងកាន់តែច្រើនឡើងថាមានទំនាក់ទំនងបញ្ច្រាសរវាងសមត្ថភាពរបស់មីក្រូជីវសាស្រ្តពោះវៀនក្នុងការជះឥទ្ធិពលដល់កម្រិតអរម៉ូន និងទទួលឥទ្ធិពលពីអរម៉ូន ដូច្នេះកម្រិតស្តេរ៉ូអ៊ីតខ្ពស់អាចមានផលវិបាកដល់សុខភាពនៅពេលក្រោយ (Tetel et al., 2018)។
ការសិក្សានេះមិនមែនគ្មានដែនកំណត់ និងការពិចារណានោះទេ។ ភាពខុសគ្នាដ៏សំខាន់មួយគឺថា យើងមិនបានធ្វើការវាយតម្លៃសរីរវិទ្យាលើសត្វនោះទេ។ ដូច្នេះ វាមិនអាចសន្និដ្ឋានដោយផ្ទាល់ថាតើការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងមីក្រូជីវមត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងជំងឺណាមួយឬអត់នោះទេ។ ការពិចារណាមួយទៀតគឺថា សត្វកណ្តុរនៅក្នុងការសិក្សានេះត្រូវបានផ្តល់ចំណីដូចគ្នានឹងម្តាយរបស់ពួកគេ។ ការសិក្សានាពេលអនាគតអាចកំណត់ថាតើការប្តូរពីរបបអាហារសម្បូរ PPA ទៅរបបអាហារគ្មាន PPA ធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវឥទ្ធិពលរបស់វាទៅលើមីក្រូជីវមដែរឬទេ។ ដែនកំណត់មួយនៃការសិក្សារបស់យើង ដូចជាការសិក្សាជាច្រើនទៀតដែរ គឺទំហំគំរូមានកំណត់។ ទោះបីជាការសន្និដ្ឋានដែលមានសុពលភាពអាចត្រូវបានទាញចេញក៏ដោយ ទំហំគំរូធំជាងនឹងផ្តល់នូវថាមពលស្ថិតិកាន់តែច្រើននៅពេលវិភាគលទ្ធផល។ យើងក៏ប្រុងប្រយ័ត្នផងដែរអំពីការទាញសេចក្តីសន្និដ្ឋានអំពីទំនាក់ទំនងរវាងការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងមីក្រូជីវមពោះវៀន និងជំងឺណាមួយ (Yap et al., 2021)។ កត្តាច្របូកច្របល់រួមទាំងអាយុ ភេទ និងរបបអាហារអាចមានឥទ្ធិពលយ៉ាងខ្លាំងទៅលើសមាសភាពនៃអតិសុខុមប្រាណ។ កត្តាទាំងនេះអាចពន្យល់ពីភាពមិនស៊ីសង្វាក់គ្នាដែលសង្កេតឃើញនៅក្នុងអក្សរសិល្ប៍ទាក់ទងនឹងទំនាក់ទំនងនៃមីក្រូជីវមពោះវៀនជាមួយនឹងជំងឺស្មុគស្មាញ (Johnson et al., 2019; Lagod and Naser, 2023)។ ឧទាហរណ៍ សមាជិកនៃពពួក Bacteroidetes ត្រូវបានបង្ហាញថាមានការកើនឡើង ឬថយចុះចំពោះសត្វ និងមនុស្សដែលមានជំងឺ ASD (Angelis et al., 2013; Kushak et al., 2017)។ ស្រដៀងគ្នានេះដែរ ការសិក្សាអំពីសមាសភាពពោះវៀនចំពោះអ្នកជំងឺដែលមានជំងឺរលាកពោះវៀនបានរកឃើញទាំងការកើនឡើង និងការថយចុះនៅក្នុងពពួកដូចគ្នា (Walters et al., 2014; Forbes et al., 2018; Upadhyay et al., 2023)។ ដើម្បីកំណត់ផលប៉ះពាល់នៃភាពលំអៀងខាងយេនឌ័រ យើងបានព្យាយាមធានាបាននូវការតំណាងស្មើគ្នានៃភេទ ដូច្នេះភាពខុសគ្នាទំនងជាត្រូវបានជំរុញដោយរបបអាហារ។ បញ្ហាប្រឈមមួយនៃចំណារពន្យល់មុខងារគឺការដកចេញនូវលំដាប់ហ្សែនដែលលែងប្រើ។ វិធីសាស្ត្រដាក់ជាចង្កោមហ្សែនរបស់យើងតម្រូវឱ្យមានអត្តសញ្ញាណលំដាប់ 95% និងភាពស្រដៀងគ្នានៃប្រវែង 85% ក៏ដូចជាការគ្របដណ្តប់ការតម្រឹម 90% ដើម្បីលុបបំបាត់ការដាក់ជាចង្កោមមិនពិត។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ក្នុងករណីខ្លះ យើងបានសង្កេតឃើញ COGs ដែលមានចំណារពន្យល់ដូចគ្នា (ឧទាហរណ៍ MUT) (រូបភាពទី 6)។ ការសិក្សាបន្ថែមទៀតគឺត្រូវការដើម្បីកំណត់ថាតើអ័រថូឡូកទាំងនេះមានលក្ខណៈខុសប្លែកពីគ្នា ជាប់ទាក់ទងនឹងហ្សែនជាក់លាក់ ឬថាតើនេះជាដែនកំណត់នៃវិធីសាស្រ្តដាក់ជាក្រុមហ្សែនឬអត់។ ដែនកំណត់មួយទៀតនៃចំណារពន្យល់មុខងារគឺការចាត់ថ្នាក់ខុសដែលអាចកើតមាន។ ហ្សែនបាក់តេរី mmdA គឺជាអង់ស៊ីមដែលគេស្គាល់ថាពាក់ព័ន្ធនឹងការសំយោគប្រូប៉ាយ៉ូណេត ប៉ុន្តែ KEGG មិនភ្ជាប់វាជាមួយនឹងផ្លូវមេតាបូលីសប្រូប៉ាយ៉ូណេតទេ។ ផ្ទុយទៅវិញ អ័រថូឡូក scpB និង mmcD មានទំនាក់ទំនងគ្នា។ ចំនួនហ្សែនដ៏ច្រើនដែលគ្មានការគោះចេញដែលបានកំណត់អាចបណ្តាលឱ្យមិនអាចកំណត់អត្តសញ្ញាណហ្សែនដែលទាក់ទងនឹង PPA នៅពេលវាយតម្លៃភាពសម្បូរបែបនៃហ្សែន។ ការសិក្សានាពេលអនាគតនឹងទទួលបានអត្ថប្រយោជន៍ពីការវិភាគមេតាត្រាន់ស្គ្រីបតូម ដែលអាចផ្តល់នូវការយល់ដឹងកាន់តែស៊ីជម្រៅអំពីលក្ខណៈមុខងាររបស់មីក្រូជីវតាពោះវៀន និងភ្ជាប់ការបញ្ចេញហ្សែនទៅនឹងផលប៉ះពាល់ដែលអាចកើតមាន។ សម្រាប់ការសិក្សាដែលពាក់ព័ន្ធនឹងជំងឺវិវឌ្ឍន៍សរសៃប្រសាទជាក់លាក់ ឬជំងឺរលាកពោះវៀន ការវាយតម្លៃសរីរវិទ្យា និងអាកប្បកិរិយារបស់សត្វគឺត្រូវការដើម្បីភ្ជាប់ការផ្លាស់ប្តូរសមាសភាពមីក្រូជីវតាទៅនឹងជំងឺទាំងនេះ។ ការសិក្សាបន្ថែមការប្តូរមីក្រូជីវតាពោះវៀនទៅក្នុងកណ្តុរដែលគ្មានមេរោគក៏នឹងមានប្រយោជន៍ក្នុងការកំណត់ថាតើមីក្រូជីវតាជាកត្តាជំរុញ ឬលក្ខណៈនៃជំងឺឬអត់។
សរុបមក យើងបានបង្ហាញថា PPA ក្នុងរបបអាហារដើរតួជាកត្តាមួយក្នុងការផ្លាស់ប្តូរសមាសភាពនៃមីក្រូជីវសាស្រ្តពោះវៀន។ PPA គឺជាសារធាតុរក្សាទុកដែលត្រូវបានអនុម័តដោយ FDA ដែលត្រូវបានរកឃើញយ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងអាហារជាច្រើនប្រភេទ ដែលនៅពេលប៉ះពាល់រយៈពេលយូរ អាចនាំឱ្យមានការរំខានដល់រុក្ខជាតិពោះវៀនធម្មតា។ យើងបានរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរនៃភាពសម្បូរបែបនៃបាក់តេរីជាច្រើន ដែលបង្ហាញថា PPA អាចមានឥទ្ធិពលលើសមាសភាពនៃមីក្រូជីវសាស្រ្តពោះវៀន។ ការផ្លាស់ប្តូរនៅក្នុងមីក្រូជីវសាស្រ្តអាចនាំឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរកម្រិតនៃផ្លូវមេតាប៉ូលីសជាក់លាក់ ដែលអាចនាំឱ្យមានការផ្លាស់ប្តូរសរីរវិទ្យាដែលពាក់ព័ន្ធនឹងសុខភាពម្ចាស់ផ្ទះ។ ការសិក្សាបន្ថែមទៀតគឺត្រូវការដើម្បីកំណត់ថាតើផលប៉ះពាល់នៃ PPA ក្នុងរបបអាហារលើសមាសភាពមីក្រូជីវសាស្រ្តអាចនាំឱ្យមានជំងឺ dysbiosis ឬជំងឺផ្សេងៗទៀតដែរឬទេ។ ការសិក្សានេះដាក់មូលដ្ឋានគ្រឹះសម្រាប់ការសិក្សានាពេលអនាគតអំពីរបៀបដែលផលប៉ះពាល់ PPA លើសមាសភាពពោះវៀនអាចប៉ះពាល់ដល់សុខភាពមនុស្ស។
សំណុំទិន្នន័យដែលបង្ហាញនៅក្នុងការសិក្សានេះអាចរកបាននៅក្នុងឃ្លាំងទិន្នន័យអនឡាញ។ ឈ្មោះឃ្លាំងទិន្នន័យ និងលេខចូលប្រើប្រាស់គឺ៖ https://www.ncbi.nlm.nih.gov/, PRJNA1092431។
ការសិក្សាលើសត្វនេះត្រូវបានអនុម័តដោយគណៈកម្មាធិការថែទាំ និងប្រើប្រាស់សត្វស្ថាប័ននៃសាកលវិទ្យាល័យ Central Florida (UCF-IACUC) (លេខអនុញ្ញាតប្រើប្រាស់សត្វ៖ PROTO202000002)។ ការសិក្សានេះអនុលោមតាមច្បាប់ បទប្បញ្ញត្តិ និងតម្រូវការរបស់ស្ថាប័នក្នុងស្រុក។
NG: ការបង្កើតគំនិត, ការរៀបចំទិន្នន័យ, ការវិភាគជាផ្លូវការ, ការស៊ើបអង្កេត, វិធីសាស្រ្ត, កម្មវិធី, ការមើលឃើញ, ការសរសេរ (សេចក្តីព្រាងដើម), ការសរសេរ (ពិនិត្យ និងកែសម្រួល)។ LA: ការបង្កើតគំនិត, ការរៀបចំទិន្នន័យ, វិធីសាស្រ្ត, ធនធាន, ការសរសេរ (ពិនិត្យ និងកែសម្រួល)។ SH: ការវិភាគជាផ្លូវការ, កម្មវិធី, ការសរសេរ (ពិនិត្យ និងកែសម្រួល)។ SA: ការស៊ើបអង្កេត, ការសរសេរ (ពិនិត្យ និងកែសម្រួល)។ ប្រធានចៅក្រម: ការស៊ើបអង្កេត, ការសរសេរ (ពិនិត្យ និងកែសម្រួល)។ SN: ការបង្កើតគំនិត, ការគ្រប់គ្រងគម្រោង, ធនធាន, ការត្រួតពិនិត្យ, ការសរសេរ (ពិនិត្យ និងកែសម្រួល)។ TA: ការបង្កើតគំនិត, ការគ្រប់គ្រងគម្រោង, ការត្រួតពិនិត្យ, ការសរសេរ (ពិនិត្យ និងកែសម្រួល)។
អ្នកនិពន្ធបានប្រកាសថា ពួកគេមិនបានទទួលការគាំទ្រផ្នែកហិរញ្ញវត្ថុសម្រាប់ការស្រាវជ្រាវ ការនិពន្ធ និង/ឬការបោះពុម្ពផ្សាយអត្ថបទនេះទេ។
អ្នកនិពន្ធប្រកាសថា ការស្រាវជ្រាវនេះត្រូវបានធ្វើឡើងក្នុងករណីដែលគ្មានទំនាក់ទំនងពាណិជ្ជកម្ម ឬហិរញ្ញវត្ថុណាមួយដែលអាចចាត់ទុកថាជាជម្លោះផលប្រយោជន៍ដែលអាចកើតមាន។ មិនអាចអនុវត្តបានទេ។
មតិទាំងអស់ដែលបានបង្ហាញនៅក្នុងអត្ថបទនេះគឺជាមតិរបស់អ្នកនិពន្ធតែប៉ុណ្ណោះ ហើយមិនចាំបាច់ឆ្លុះបញ្ចាំងពីទស្សនៈរបស់ស្ថាប័ន អ្នកបោះពុម្ពផ្សាយ អ្នកកែសម្រួល ឬអ្នកពិនិត្យរបស់ពួកគេឡើយ។ ផលិតផលណាមួយដែលត្រូវបានវាយតម្លៃនៅក្នុងអត្ថបទនេះ ឬការអះអាងណាមួយដែលធ្វើឡើងដោយក្រុមហ៊ុនផលិតរបស់ពួកគេ មិនត្រូវបានធានា ឬគាំទ្រដោយអ្នកបោះពុម្ពផ្សាយឡើយ។
សម្ភារៈបន្ថែមសម្រាប់អត្ថបទនេះអាចរកបាននៅលើអ៊ីនធឺណិត៖ https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/frmbi.2024.1451735/full#supplementary-material
Abdelli LS, Samsam A, Nasser SA (2019)។ អាស៊ីតប្រូពីយ៉ូនិកបង្កឱ្យមានជំងឺ gliosis និងការរលាកសរសៃប្រសាទដោយការគ្រប់គ្រងផ្លូវ PTEN/AKT នៅក្នុងជំងឺវិសាលគមអូទីសឹម។ របាយការណ៍វិទ្យាសាស្ត្រលេខ 9, 8824–8824។ doi: 10.1038/s41598-019-45348-z
Aitchison, J. (1982). ការវិភាគស្ថិតិនៃទិន្នន័យសមាសភាព។ JR Stat Soc Ser B Methodol. 44, 139–160. doi: 10.1111/j.2517-6161.1982.tb01195.x
Ahn J, Kwon H, Kim YJ (2023)។ សមាមាត្រ Firmicutes/Bacteroidetes ជាកត្តាហានិភ័យនៃជំងឺមហារីកសុដន់។ ទិនានុប្បវត្តិវេជ្ជសាស្ត្រគ្លីនិក, 12, 2216។ doi: 10.3390/jcm12062216
Anders S., Huber W. (2010)។ ការវិភាគកន្សោមឌីផេរ៉ង់ស្យែលនៃទិន្នន័យរាប់លំដាប់។ Nat Prev. 1–1, 1–10។ doi: 10.1038/npre.2010.4282.1
Angelis, MD, Piccolo, M., Vannini, L., Siragusa, S., Giacomo, AD, Serrazanetti, DI, et al. (2013). មីក្រូជីវសាស្រ្តក្នុងលាមក និងមេតាបូឡូមចំពោះកុមារដែលមានជំងឺអូទីសឹម និងជំងឺវិវឌ្ឍន៍ទូទៅដែលមិនត្រូវបានបញ្ជាក់ផ្សេងពីនេះ។ PloS One 8, e76993. doi: 10.1371/journal.pone.0076993
Averina OV, Kovtun AS, Polyakova SI, Savilova AM, Rebrikov DV, Danilenko VN (2020)។ លក្ខណៈប្រព័ន្ធប្រសាទបាក់តេរីនៃមីក្រូជីវសាស្ត្រពោះវៀនចំពោះកុមារតូចៗដែលមានជំងឺអូទីសឹម។ ទិនានុប្បវត្តិអតិសុខុមជីវសាស្ត្រវេជ្ជសាស្ត្រ 69, 558–571។ doi: 10.1099/jmm.0.001178
Baquero F., Nombela K. (2012)។ មីក្រូជីវសាស្ត្រជាសរីរាង្គមនុស្ស។ មីក្រូជីវសាស្ត្រគ្លីនិក និងការឆ្លងមេរោគ 18, 2–4។ doi: 10.1111/j.1469-0691.2012.03916.x
Baur T., Dürre P. (2023)។ ការយល់ដឹងថ្មីៗអំពីសរីរវិទ្យានៃបាក់តេរីផលិតអាស៊ីតប្រូភីយ៉ូនិក៖ Anaerotignum propionicum និង Anaerotignum neopropionicum (ដែលពីមុនហៅថា Clostridium propionicum និង Clostridium neopropionicum)។ អតិសុខុមប្រាណ 11, 685។ doi: 10.3390/microorganisms11030685
Bazer FW, Spencer TE, Wu G, Cudd TA, Meininger SJ (2004) ។ អាហារូបត្ថម្ភរបស់ម្តាយ និងការលូតលាស់គភ៌។ J Nutr ។ ១៣៤, ២១៦៩–២១៧២។ doi: 10.1093/jn/134.9.2169
Benjamini, Y., និង Hochberg, J. (1995). ការគ្រប់គ្រងអត្រាវិជ្ជមានមិនពិត៖ វិធីសាស្រ្តជាក់ស្តែង និងមានប្រសិទ្ធភាពចំពោះការធ្វើតេស្តច្រើនដង។ JR Stat Soc Ser B Methodol. 57, 289–300. doi: 10.1111/j.2517-6161.1995.tb02031.x
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ ថ្ងៃទី ១៨ ខែមេសា ឆ្នាំ ២០២៥